DNase I
DNase I (дезоксирибонуклеаза I) – бір немесе екі тізбекті ДНҚ-ны қорыта алатын эндодеоксирибонуклеаза.Ол 5′-терминалында фосфат топтары бар монодезоксинуклеотидтерді немесе бір немесе екі тізбекті олигодеоксинуклеотидтерді және 3′-терминалында гидроксилді өндіру үшін фосфодиэфирлік байланыстарды таниды және ажыратады.DNase I белсенділігі Са2+-ге тәуелді және Mn2+ және Zn2+ сияқты екі валентті металл иондарымен белсендірілуі мүмкін.5мМ Са2+ ферментті гидролизден қорғайды.Mg2+ болған кезде фермент ДНҚ-ның кез келген тізбегіндегі кез келген жерді кездейсоқ танып, ажырата алады.Mn2+ болған кезде ДНҚ-ның қос жіптері бір уақытта танып, бір жерде дерлік ыдырап, 1-2 нуклеотидтері шығып тұрған жалпақ ДНҚ фрагменттерін немесе жабысқақ ұшы ДНҚ фрагменттерін түзе алады.
Өнім қасиеті
Ірі қара безінің DNase I ашытқы экспрессия жүйесінде экспрессияланды және тазартылды.
Cқарсыластар
| Құрамдас | Көлемі | |||
| 0,1КУ | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase жоқ | 20 мкл | 200 мкл | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I буфері | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5×10 мл |
Тасымалдау және сақтау
1. Сақтау тұрақтылығы: – сақтау үшін 15℃~-25℃;
2.Тасымалдау тұрақтылығы: Мұз қаптамалары астында тасымалдау;
3. Берілген: 10 мМ Tris-HCl, 2 мМ CaCl2, 50% глицерин, 25℃ кезінде рН 7,6 .
Бірлік анықтамасы
Бір бірлік 1 мкг pBR322 ДНҚ-ны 37°C температурада 10 минут ішінде толығымен ыдырататын фермент мөлшері ретінде анықталады.
Сапа бақылауы
RNase:1,6 мкг MS2 РНҚ бар 5U DNase I 37 ℃ температурада 4 сағат ішінде агарозды гель электрофорезі арқылы анықталғандай деградация болмайды.
Бактериялық Эндотоксин:LAL-сынағы, Қытай фармакопеясының IV 2020 басылымына сәйкес, гельді шектеу сынағы әдісі, жалпы ереже (1143).Бактериялық эндотоксин мөлшері ≤10 EU/mg болуы керек.
Пайдалану нұсқаулары
1. Төменде көрсетілген пропорциялар бойынша RNase жоқ түтіктегі реакция ерітіндісін дайындаңыз:
| Құрамдас | Көлемі |
| РНҚ | X мкг |
| 10 × DNase I буфері | 1 мкл |
| DNase I, RNase жоқ(5U/мкл) | 1 U/мкг РНҚ |
| ddH2O | 10 мкл дейін |
2,37 ℃ 15 минутқа;
3. Реакцияны тоқтату үшін тоқтату буферін қосыңыз және DNase I инактивациялау үшін 65℃ температурада 10 минут қыздырыңыз. Үлгіні келесі транскрипция тәжірибесі үшін тікелей пайдалануға болады.
Ескертпелер
1. РНҚ-ның бір мкг үшін 1U DNase I немесе 1мкг РНҚ-дан азы үшін 1U DNase I пайдаланыңыз.
2.ЭДТА ферментті инактивациялау кезінде РНҚ-ны ыдыраудан қорғау үшін 5 мМ соңғы концентрацияға қосу керек.
