Ультрануклеаза
Ультрануклеаза - кең ауқымда екі немесе бір тізбекті, сызықты немесе шеңберлі ДНҚ немесе РНҚ-ны ыдыратуға қабілетті, нуклеин қышқылдарын ұзындығы 5'-монофосфатты олигонуклеотидтерге дейін толық ыдыратуға қабілетті Serratia marcescens-тен алынған генетикалық инженерліктендонуклаз. .Гендік инженерлік модификациядан кейін өнім ішек таяқшасында (E. coli) ашытылды, экспрессияланды және тазартылды, бұл ғылыми зерттеулерде жасуша үстіңгі затының және жасуша лизатының тұтқырлығын төмендетеді, сонымен қатар ақуызды тазарту тиімділігі мен функционалдық зерттеулерін жақсартады.Ол сондай-ақ гендік терапияда, вирустарды тазартуда, вакциналар өндірісінде, ақуыз және полисахаридтер фармацевтикалық өнеркәсібінде негізгі нуклеин қышқылын кетіретін реагент ретінде қолданылуы мүмкін.
Өнімнің ерекшеліктері
| CAS нөмірі | 9025-65-4 |
| EC № | |
| Молекулалық салмақ | 30кДа |
| Изоэлектрлік нүкте | 6.85 |
| Протеин тазалығы | ≥99%（ SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Арнайы әрекет | ≥1.1×106U/мг |
| Оңтайлы температура | 37°C |
| Оңтайлы рН | 8.0 |
| Протеаза белсенділігі | теріс |
| Биологиялық жүктеме | ＜10CFU/100,000U |
| Қалдық хост-жасуша ақуызы | ≤10ppm |
| Ауыр металл | ≤10ppm |
| Бактериялық эндотоксин | ＜0,25EU/1000U |
| Сақтау буфері | 20мМ Tris-HCl, рН 8,0, 2мМ MgCl2 ， 20мМ NaCl, 50% глицерин |
Сақтау шарттары
≤0°C тасымалдау；-25~-15°C Сақтау， 2 жыл жарамдылық (мұздату-ерітуді болдырмаңыз).
Бірлік анықтамасы
Олигонуклеотидтерге кесу арқылы қорытылатын 37 мкг лосось сперматозоидінің ДНҚ-сына баламалы, 37 °C, рН 8,0 кезінде 30 минут ішінде △A260 сіңіру мәнін 1,0-ге өзгерту үшін пайдаланылатын ферменттің мөлшері белсенді бірлік (U) ретінде анықталды.
Сапа бақылауы
Қалдық хост-жасуша ақуызы: ELISA жинағы
•Протеаза Қалдықтар: 250KU/мл UltraNuclease субстратпен 60 минут бойы әрекеттесті, белсенділік анықталмады.
•Бактериялық эндотоксин: LAL-Test, Қытай Халық Республикасының Фармакопеясы 4-том (2020 жылғы шығарылым) гельді шектеу сынағы әдісі.Жалпы ережелер (1143).
•Биологиялық жүктеме: Қытай Халық Республикасының Фармакопеясы 4-том (2020 жылғы басылым) – Жалпы
Стерилдік сынау ережелері (1101), ҚХР ұлттық стандарты, GB 4789.2-2016.
•Ауыр металл:ICP-AES, HJ776-2015.
Операция
SDS концентрациясы 0,1% немесе EDTA-дан жоғары болған кезде Ultranuclease белсенділігі айтарлықтай тежелді
концентрациясы 1 ммМ астам болды. Тритон X- 100, Tween 20 және Tween 80 беттік белсенді зат нуклеазаға әсер етпеді.
концентрациясы 1,5%-дан төмен болған кездегі қасиеттер.
| Операция | Оңтайлы жұмыс | Жарамды операция |
| Температура | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2ммМ | 1-15ммМ |
| DTT | 0-100 мм | >100 мм |
| 2-Меркаптоэтанол | 0-100 мм | >100 мм |
| Бір валентті металл иондары (Na+, K+ т.б.) | 0-20 мМ | 0-200 мм |
| PO43- | 0-10 мм | 0-100 мм |
Қолданылуы және дозасы
• Вакцина өнімдерінен экзогендік нуклеин қышқылын алып тастаңыз, нуклеин қышқылының қалдық уыттылығы қаупін азайтыңыз және өнімнің қауіпсіздігін жақсартыңыз.
• Нуклеин қышқылынан туындаған азық сұйықтығының тұтқырлығын төмендетіңіз, өңдеу уақытын қысқартыңыз және ақуыз шығымын арттырыңыз.
• Оралған бөлшекті (вирус, инклюзия денесі, т.б.) итермелейтін нуклеин қышқылын алып тастаңыз.
бөлшекті шығаруға және тазартуға.
| Эксперименттік түрі | Протеин өндірісі | Вирус, вакцина | Жасушалық препараттар |
| Ұяшықтар саны | 1 г жасуша ылғалды салмағы (10 мл буфермен қайта суспензияланған) | 1 л ашыту сұйық үстіңгі зат | 1 л мәдениет |
| Ең төменгі доза | 250U | 100U | 100U |
| Ұсынылатын доза | 2500U | 25000U | 5000U |
• Нуклеазды өңдеу баған хроматографиясы, электрофорез және блтингтік талдау үшін үлгінің ажыратымдылығын және қалпына келуін жақсарта алады.
• Гендік терапияда тазартылған адено-ассоциирленген вирустарды алу үшін нуклеин қышқылы жойылады.
