BspQI
BspQI рекомбинантты түрде E. coli-де экспрессиялануы мүмкін, олар белгілі бір учаскелерді тани алады және келесі жағдайларда өндіріледі.
BspQI, IIs шектеуші эндонуклеаза рестрикциялық эндонуклеаза, Bacillus sphaericus-тен клондалған және модификацияланған BspQI генін тасымалдайтын рекомбинантты E. coli штаммынан алынған.Ол белгілі бір сайттарды тани алады және тану реті мен бөліну орындары төмендегідей:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Өнім ерекшеліктері
1. Жоғары белсенділік, Тез ас қорыту;
2. «скальпель» сияқты дәл кесуді қамтамасыз ететін төмен жұлдыз белсенділігі;
3. BSA жоқ және жануар тексіз;
Метилдену сезімталдығы
Dметилдену:Сезімтал емес;
Dсм метилденуі:Сезімтал емес;
CpG метилденуі:Сезімтал емес;
Сақтау шарттары
Өнім ≤ 0℃ жөнелтілуі керек;-25~-15℃ күйде сақтаңыз.
Сақтау буфері
20мМ Tris-HCl, 0,1мМ ЭДТА, 500 мМ KCl, 1,0 мМ дитиотрейтол, 500 мкг/мл рекомбинантты альбумин, 0,1% Trition X- 100 және 50% глицерин (рН 7,0 @2).
Бірлік анықтамасы
Бір бірлік жалпы реакция көлемі 50 мкл болатын 50°C температурада 1 мкг Ішкі бақылау ДНҚ-ны 1 сағатта қорытуға қажетті фермент мөлшері ретінде анықталады.
Сапа бақылауы
Протеин тазалығын талдау (SDS-PAGE):BspQI тазалығы SDS-PAGE талдауымен анықталған ≥95% болды.
RNase:1,6 мкг MS2 РНҚ бар 10U BspQI 50℃ температурада 4 сағат бойы агарозды гель электрофорезі арқылы анықталғандай деградацияны тудырмайды.
Арнайы емес ДНҚ белсенділігі:10U BspQI 1μg λ ДНҚ-сы бар 16 сағат бойы 50℃ температурада, 1 сағаттағы 50℃-пен салыстырғанда, агарозды гель электрофорезі арқылы анықталғандай артық ДНҚ-ны бермейді.
Лигация және қайта кесу:1 мкг λДНҚ 10U BspQI арқылы қорытылғаннан кейін ДНҚ фрагменттерін 16ºC температурада T4 ДНҚ лигазасымен байланыстыруға болады.Және бұл байланыстырылған фрагменттерді BspQI көмегімен қайта кесуге болады.
E. coli ДНҚ: E. coli 16s rDNA-спецификалық TaqMan qPCR анықтау E.coli геномының қалдығы ≤ 0,1pg/ul екенін көрсетті.
Хост ақуызының қалдығы:≤ 50 бет/мин
Бактериялық Эндотоксин: LAL-сынағы, Қытай фармакопеясының IV 2020 басылымына сәйкес, гельді шектеу сынағы әдісі, жалпы ереже (1143).Бактериялық эндотоксин мөлшері ≤10 EU/mg болуы керек.
Реакция жүйесі және шарттары
| Құрамдас | Көлемі |
| BspQ I (10 U/мкл) | 1 мкл |
| ДНҚ | 1 мкг |
| 10 x BspQ I буфері | 5 мкл |
| dd H2O | 50 мкл дейін |
Реакция шарттары: 50℃, 1~16 сағ.
Ыстықты инактивациялау: 80°C 20 мин.
Ұсынылған реакция жүйесі мен шарттары салыстырмалы түрде жақсы ферменттік ас қорыту әсерін қамтамасыз ете алады, ол тек анықтама үшін ғана берілген, егжей-тегжейлі ақпарат алу үшін эксперимент нәтижелерін қараңыз.
Өнімді қолдану
Шектеу эндонуклеаза қорыту, Жылдам клондау.
Ескертпелер
1. Фермент көлемі реакция көлемінің ≤ 1/10 бөлігі.
2. Жұлдыздық белсенділік глицерин концентрациясы 5%-дан жоғары болғанда пайда болуы мүмкін.
3. Бөліну белсенділігі субстрат ұсынылған қатынастан төмен болғанда орын алуы мүмкін.
