RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Бұл өнімде реакция буфері, RT-Enzymes Mix (Bst ДНҚ полимераза және ыстыққа төзімді кері транскриптаза), лиофилденген қорғаныс заттары және хромогендік бояғыш компоненттері бар.Қолдану үшін жай ғана буферді пайдаланыңыз, реакция ферменті мен праймер араласады және шаблонға қосылады;лиофилизирленген протекторды қосу тікелей болуы мүмкін.Ол лиофилизаторға қосылып, лиофилизацияланды және пайдаланған кезде тек праймерлер мен шаблондар қосылды.Бұл жинақ күшейтуді жылдам, анық визуалды анықтауды қамтамасыз етеді, ол теріс реакция қызыл түспен, ал оң реакция сары түске ауысу арқылы көрсетіледі.
Құрамдас
| Құрамдас | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Ілмекті күшейту буфері (бояғышпен) | 0,96 мл | 4,80 мл×2 | 9,60 мл×10 |
| RT-ферменттер қоспасы | 270 мкл | 2,70 мл | 2,70 мл×10 |
| Лиофильденген қорғаныш | 0,96 мл×2 | 9,60 мл×2 | 9,60 мл×20 |
Қолданбалар
ДНҚ немесе РНҚ изотермиялық күшейту үшін.
Сақтау шарттары
Құрғақ мұзбен тасымалданады, -25~ -15℃ температурада сақталады.Жиі мұздату-ерітуден аулақ болыңыз, өнім 12 ай бойы жарамды.
Протокол
1.Бөлме температурасында қолданылатын реакция буферін ерітіңіз.Түтіктерді мұқият араластыру үшін қысқаша құйыңыз немесе бірнеше рет төңкеріңіз, содан кейін сұйықтықты түтік түбіне жинау үшін центрифугалаңыз.
2.Реакция жүйесін дайындау.Бұл реагентті екі реакциялық жүйеде, сұйық реакциялық қоспада және лиофилденген жүйе қоспасында дайындауға болады.
1) Сұйық реакция қоспасын дайындаңыз
| Құрамдас | Көлемі |
| Ілмекті күшейту буфері (бояғышпен) | 10 мкл |
| RT-ферменттер қоспасы | 2,8 мкл |
| 10 × Праймер қоспасыa | 5 мкл |
| ДНҚ/РНҚ шаблондары b | × мкл |
| Нуклеазсыз су | 50 мкл дейін |
2) Лиофилизация жүйесінің қоспасы
① Лиофилденген қоспаны дайындаңыз
| Құрамдас | Көлемі |
| Ілмекті күшейту буфері (бояғышпен) | 10 мкл |
| Лиофильденген қорғаныш | 20 мкл |
| RT-ферменттер қоспасы | 2,8 мкл |
| Нуклеазсыз су | 50 мкл дейін |
② Лиофилизация: Дайындалған Микс 50 мкл жүйеде лиофилденді
③ Реакция қоспасын дайындаңыз
| Құрамдас | Көлемі |
| Лиофильденген қоспа | 1 дана |
| 10 × Праймер қоспасыa | 5 мкл |
| ДНҚ/РНҚ шаблондары b | × мкл |
| Нуклеазсыз су | 50 мкл дейін |
Ескертулер:
1) а.10×Primer Mix : 16 мкМ FIP/BIP, 2 мкм F3/B3, 4 мкм цикл F/B;
2) б.DEPC (суда еритін) нуклеин қышқылдары үшін ұсынылады.
1.65°C температурада 30-45 минут инкубациялаңыз, оны түс өзгеруіне сәйкес ұзартуға болады.
2.Қарапайым көзге қарағанда, сары оң, ал қызыл теріс болды.
Ескертпелер
1.Бөлме температурасында мұқият араластыру үшін буферлік түтіктің түбінде тұз пайда болуы мүмкін, түтіктерді қысқаша құйыңыз немесе бірнеше рет төңкеріңіз.
2.Праймерлердің күйіне сәйкес реакция температурасын 62 ℃ және 68 ℃ аралығында оңтайландыруға болады.
3.Буып-түйілген реагенттер ұзақ уақыт бойы ауада болмауы керек.
4.Қызыл және сары түссіздену реакциясы реакция жүйесінің рН өзгеруіне байланысты, ddH пайдалану ұсынылатын Tris нуклеин қышқылын сақтау ерітіндісін қолданбаңыз.2O сақталған нуклеин қышқылы;
5.Эксперимент стандартталған болуы керек, оның ішінде реакциялық жүйені дайындау, лиофилизация, үлгіні өңдеу және үлгі қосу процесі;
6.Ластануды болдырмау үшін реакция жүйесін ультра таза стендте дайындау ұсынылады, басқаларда жалған позитивті кедергілерді болдырмау үшін бөлменің түтін сорғышына шаблондарды қосыңыз.
