Үлгіні шығару реагенті
Үлгіні шығару реагенті молекулалық POCT диагностикалық сценарийлеріне арналған.Тікелей күшейту LAMP және тікелей күшейту ПТР екі жүйесі үшін нуклеин қышқылын экстракциялаудың қажеті жоқ.Үлгінің шикі лизатын тікелей күшейтуге болады, мақсатты генді дәл анықтауға болады, үлгіні анықтау уақытын одан әрі қысқартуға болады, бұл молекулалық POCT қолдану талаптарына тамаша сәйкес келеді.Ол мұрын жағындыларына, жұлдыру жағындыларына және басқа үлгі түрлеріне жарамды.Өңделген үлгілерді нақты уақыттағы флуоресцентті сандық ПТР немесе LAMP анықтау үшін тікелей пайдалануға болады және әдеттегі экстракция әдістерімен бірдей нәтижелерге нуклеин қышқылын алудың күрделі операцияларынсыз қол жеткізуге болады.
Сақтау шарттары
Бөлме температурасында тасымалдау және сақтау.
Сапа бақылауы
Функционалды анықтау – сандық qPCR: 800 мкл үлгіні шығару реагент жүйесі күшейтілді
1000 данамен жаңа псевдовирус, мұрын жағындысының бір үлгісі, нәтижесінде ұқсас күшейту қисықтары жәнеΔCt мәндері ± 0,5 Кт.
Эксперименттік процедурарес
1. 800 мкл үлгіні босату реагентін алыңыз және лизис ерітіндісін 1,5 мл үлгі алу түтігіне таратыңыз.
2. Тампонмен мұрын жағындысын немесе жұлдыру жағындысын алыңыз;Мұрыннан жағынды сынамасын алу процедурасы: стерильді жағынды алыңыз және оны танау тесіктеріне салыңыз, баяу шамамен 1,5 см тереңдікке жылжытыңыз, мұрынның шырышты қабатына 15 секундтан астам 4 рет ақырын айналдырыңыз. , содан кейін сол жағындымен басқа мұрын қуысында бірдей операцияны қайталаңыз. Тамақ жағындысынан сынама алу процедурасы: стерильді жағынды алыңыз және ақырын, жұтқыншақ бадамша бездері мен артқы жұтқыншақ қабырғасын 3 рет жылдам сүртіңіз.
3.Тампонды дереу үлгі алу түтігіне салыңыз.Үлгінің сынама алу түтігінде толығымен элюциясын қамтамасыз ету үшін жағынды басын айналдыру және сақтау ерітіндісінде кемінде 30 секунд араластыру керек.
4. Бөлме температурасында (20~25℃) 1 минут бойы инкубациялау, лизис буферін дайындау аяқталды.
5. 25 мкл жүйесі RT-PCR және RT-LAMP екеуі де анықтау эксперименттері үшін үлгі қосудың 10 мкл мөлшерімен үйлесімді болды.
Ескертпелер
1. Бір тампонға сәйкес келетін үлгі тікелей лизатының ең аз мөлшері 400 мкл дейін реттелуі мүмкін, оны сынақ қажеттіліктеріне сәйкес реттеуге болады.
2. Үлгіні сынама шығару реагентімен өңдегеннен кейін сынақтың келесі кезеңін мүмкіндігінше тезірек өткізу ұсынылады, күту аралық уақыты 1 сағаттан аз болғаны дұрыс.
3. Үлгі лизатының рН мәні қышқыл, ал анықтау жүйесінде белгілі бір буфер болуы керек.Ол рН буфері бар ПТР, RT-ПТР және LAMP флуоресценциясын анықтаудың көпшілігі үшін қолайлы, бірақ буферсіз LAMP колориметриялық анықтау үшін жарамсыз.
