Температураға сезімтал UNG
Температураға сезімтал UNG (TS-UNG) - E. coli рекомбинантты өрнек арқылы алынған.Фермент құрамында урацил бар бір және екі тізбекті ДНҚ-дан бос урацилдің бөлінуін катализдейді және РНҚ-ға қатысты белсенді емес.E. coli генінің кәдімгі UNG ферментімен салыстырғанда, TS-UNG ферменті төмен температурада (20℃~37℃) жоғары белсенділікке ие және температураға сезімтал және dUTP-құрамды күшейтудің ыдырауын болдырмай, оңай инактивацияланады (50℃) өнімдерді бөлме температурасында кәдімгі UNG ферментін инактивациялаудан кейін қалуы мүмкін қалдық белсенділікке байланысты.Сондықтан TS-UNG ферменті тек ПТР ластануының алдын алу реакциясы үшін жарамды, сонымен қатар RT-ПТР күшейту бағдарламасына жақсы сәйкес келеді және RT-ПТР ластануының алдын алу реакциясында қолданылуы мүмкін.
Ұсынылатын қолданба
Ластанудың алдын алу күшейту
Сақтау жағдайы
Ұзақ мерзімді сақтау үшін -20°C, қолданар алдында жақсылап араластыру керек, жиі мұздату-ерітуден аулақ болу керек.
Сақтау буфері
20 мМ Tris-HCl (рН 7,5) , 100 мМ NaCl, 0,1 мМ EDTA, 1 мМ DTT, тұрақтандырғыш, 50% глицерин.
Бірлік анықтамасы
Құрамында dU негіздері бар 1 мкг бір тізбекті ДНҚ-ны 37°C температурада 1 сағатта ыдырату үшін қажетті фермент мөлшері 1 белсенділік бірлігін (U) құрайды.
Сапа бақылауы
1.SDS-PAGE электрофоретикалық тазалығы 98%-дан жоғары
2.Деградация белсенділігі, партиядан партияға бақылау, тұрақтылық
3.Экзогендік нуклеаза белсенділігі жоқ, экзогендік эндонуклеаза немесе экзонуклеаза ластануы жоқ.
Нұсқаулар
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Соңғы концентрация |
| 10 × ПТР буфері (dNTP бос, Mg²+Тегін) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 мкм |
| dUTP (dTTP ауыстыру) | - | 200-600 мкм |
| 25 мМ MgCl2 | 2-8 мкл | 1-4 мМ |
| 5 U/мкл Так | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Праймер қоспасыа | 2 | 1× |
| Үлгі | - | ＜1мкг/реакция |
| ddH₂O | 50-ге дейін | - |
Ескертпе: a: qPCR/qRT-PCR үшін пайдаланылса, флуоресцентті зондты реакция жүйесіне қосу керек.Әдетте, 0,2 мкМ түпкілікті праймер концентрациясы жақсы нәтиже бере алады;реакция өнімділігі нашар болғанда, праймер концентрациясын 0,2-1 мкМ диапазонында реттеуге болады.Әдетте, зонд концентрациясы 0,1-0,3 мкм диапазонында оңтайландырылған.Праймер мен зондтың ең жақсы комбинациясын табу үшін концентрация градиенті эксперименттерін жүргізуге болады.
Ескертпелер
1.TS-UNG ферментінің оңтайлы реакция температурасы салыстырмалы түрде төмен және оны 20℃~37℃ диапазонында оңтайландыруға болады, ферменттің дозасын және реакция уақытын 0,1~0,5 U, 5~ диапазонында оңтайландыруға болады. 10 мин;ал фермент кері транскрипция процесінде инактивациялануы мүмкін.
2.Ол ластануды болдырмау үшін ПТР және RT-ПТР үшін жарамды.
3.Жиі мұздату-ерітуден аулақ болыңыз және температураның үлкен ауытқуларына ұшырамаңыз.
4.Күшейтілетін әртүрлі гендердің dUTP пайдалану тиімділігі мен UNG ферментіне сезімталдығы әртүрлі, сондықтан UNG жүйесін пайдалану анықтау сезімталдығының төмендеуіне әкелсе, реакция жүйесін реттеу және оңтайландыру қажет, егер сізге техникалық қолдау қажет болса, хабарласыңыз. біздің компания.
