Bst 2.0 ДНҚ полимераза (глицеринсіз)
Bst ДНҚ полимераза V2 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I-тен алынған, оның 5′→3′ ДНҚ полимераза белсенділігі және күшті тізбекті ауыстыру белсенділігі бар, бірақ 5′→3′ экзонуклеаза белсенділігі жоқ.Bst DNA Polymerase V2 тізбекті ауыстыру, изотермиялық күшейту LAMP (Loop mediated isothermal amplification) және жылдам реттілік үшін өте қолайлы.
Құрамдас бөліктер
| Құрамдас | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(глицеринсіз)(8U/мкл) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10×HC Bst V2 буфері | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 мл |
| MgSO4(100ммМ) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 мл |
Қолданбалар
1.LAMP изотермиялық күшейту
2.ДНҚ тізбегінің бір орын ауыстыру реакциясы
3. Жоғары GC генін секвенирлеу
4. Нанограмма деңгейіндегі ДНҚ секвенциясы.
Сақтау жағдайы
0°C төмен температурада тасымалдау және -25°C~-15°C температурада сақтау керек.
Бірлік анықтамасы
Бір бірлік 65°C температурада 30 минут ішінде қышқылда ерімейтін материалға 25 нмоль dNTP қосатын ферменттің мөлшері ретінде анықталады.
Сапа бақылауы
1.Протеин тазалығын талдау (SDS-PAGE):Bst ДНҚ полимераза V2 тазалығы Coomassie Blue анықтау арқылы SDS-PAGE талдауымен анықталған ≥99% құрайды.
2.Экзонуклеаза белсенділігі:1 мкг λ -Hind Ⅲ дайджест ДНҚ бар кемінде 8 U Bst ДНҚ полимераза V2 бар 50 мкл реакцияны 37 ℃ температурада 16 сағат бойы инкубациялау анықталғандай анықталатын деградацияға әкелмейді.
3.Никаза белсенділігі:Құрамында 1 мкг pBR322 ДНҚ бар кемінде 8 U Bst ДНҚ полимераза V2 бар 50 мкл реакцияны 37°C температурада 16 сағат бойы инкубациялау анықталғандай анықталатын деградацияға әкелмейді.
4.RNase белсенділігі:Құрамында 1,6 мкг MS2 РНҚ бар 1,6 мкг MS2 РНҚ бар кемінде 8 U Bst ДНҚ полимераза V2 бар 50 мкл реакцияны 37°C температурада 16 сағат бойы инкубациялау анықталғандай анықталатын деградацияға әкелмейді.
5.E. coli ДНҚ:120 U Bst ДНҚ полимераза V2 E. coli геномдық ДНҚ бар-жоғына E. coli 16S rRNA локусына тән праймерлері бар TaqMan qPCR көмегімен тексеріледі.E. coli геномдық ДНҚ ластануы ≤1 көшірме.
LAMP реакциясы
| Құрамдас бөліктер | 25мкл |
| 10×HC Bst V2 буфері | 2,5 мкл |
| MgSO4 (100ммМ) | 1,5 мкл |
| dNTPs (әрқайсысы 10 мМ) | 3,5 мкл |
| SYTO™ 16 жасыл (25×)a | 1,0 мкл |
| Праймер қоспасыb | 6 мкл |
| Bst ДНҚ полимераза V2 (глицеринсіз) (8 U/uL) | 1 мкл |
| Үлгі | × мкл |
| ddH₂O | 25 мкл дейін |
Ескертулер:
1) а.SYTOTM 16 Green (25×): Эксперименттік қажеттіліктерге сәйкес басқа бояғыштарды алмастырғыш ретінде пайдалануға болады;
2) б.Праймер қоспасы: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB және басқа көлемдерді араластыру арқылы алынған.
Реакция және жағдай
1 × HC Bst V2 буфері, инкубация температурасы 60°C және 65°C арасында.
Жылу инактивациясы
80 °C，20мин
