DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
Мысықтың №: HC4007A
DNase I (дезоксирибонуклеаза I) – бір немесе екі тізбекті ДНҚ-ны қорыта алатын эндодеоксирибонуклеаза.Ол 5'-терминалында фосфат топтары және 3'-терминалында гидроксил бар монодезоксинуклеотидтерді немесе бір немесе екі тізбекті олигодеоксинуклеотидтерді өндіру үшін фосфодиэфирлік байланыстарды таниды және ажыратады.DNase I белсенділігі Са-ға тәуелді2+және Mn сияқты екі валентті металл иондарымен белсендірілуі мүмкін2+және Zn2+.5 мМ Ca2+ферментті гидролизден қорғайды.Mg қатысуымен2+, фермент кез келген ДНҚ тізбегіндегі кез келген учаскені кездейсоқ танып, ажырата алады.Мн қатысуымен2+, ДНҚ-ның қос тізбегі бір уақытта тану және 1-2 нуклеотидтері шығып тұрған жалпақ ДНҚ фрагменттерін немесе жабысқақ ұшы ДНҚ фрагменттерін қалыптастыру үшін бір жерде дерлік ыдырауға болады.
Құрамдас бөліктер
| Аты | 0,1КУ | 1KU | 5 КУ | 50 КУ |
| DNase I, RNase жоқ | 20 мкл | 200 мкл | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I буфері | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Сақтау шарттары
-25℃~-15℃ сақтау үшін;Мұз пакеттерінің астында тасымалдау.
Нұсқаулар
1. Төменде көрсетілген пропорциялар бойынша RNase жоқ түтіктегі реакция ерітіндісін дайындаңыз:
| Құрамдас | Көлемі |
| РНҚ | X мкг |
| 10 × DNase I буфері | 1 мкл |
| DNase I, RNase жоқ(5U/мкл) | 1 U/мкг РНҚ① |
| ddH2O | 10 мкл дейін |
Ескертпе: ①РНҚ мөлшеріне қарай қосу қажет DNase I көлемін есептеңіз.
2. 37 ℃ 15 минутқа;
3. 2,5мМ~5мМ соңғы концентрацияға 0,5М ЭДТА қосып, реакцияны тоқтату үшін 65℃ температурада 10 минут қыздырыңыз.Үлгіні кері транскрипция сияқты келесі реакция үшін тікелей пайдалануға боладыэксперимент.
Бірлік анықтамасы
Бір бірлік pBR322 1 мкг толығымен ыдырататын фермент мөлшері ретінде анықталады37°С температурада 10 минутта ДНҚ.
Сапа бақылауы
RNase:1,6 мкг MS2 РНҚ бар 5U DNase I 37°C температурада 4 сағат бойы деградацияны тудырмайды.агарозды гель электрофорезі арқылы анықталады.
Ескертпелер
1. Өзіңіз 0,5 MEDTA дайындаңыз.
2. РНҚ бір мкг үшін 1U DNase I пайдаланыңыз.Дегенмен, егер РНҚ 1 мкг-дан аз болса, 1U DNase I пайдаланыңыз.
3. Жұмыс кезінде ферментті мұзға қойыңыз.
