Superstart qPCR Premix plus-UNG
Мысықтың №: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG – лиофилизация процестері үшін арнайы әзірленген зонд негізіндегі анықтау арқылы нақты уақыттағы ПТР сапалық және сандық реакцияларына арналған арнайы реагент.Оның құрамында жаңа ыстық басталатын фермент Hotstart Taq plus (DG) бар, оның Taq ферментінің белсенділігі бөлме температурасында тығыздалған, праймердің спецификалық емес жасытуынан немесе төмен температура жағдайында праймер димерінің түзілуінен туындаған спецификалық емес күшейтуді тиімді тежейді, осылайша жақсартады. күшейту реакциясының ерекшелігі.Бұл реагент qPCR реакцияларының тиімділігі мен сезімталдығын айтарлықтай арттыра отырып, жылдам іске қосу үшін оңтайландырылған qPCR арнайы буферін және UNG/dUTP ластанудан қорғау жүйесін пайдаланады.Ол сандық аумақтардың кең ауқымында жақсы стандартты қисықтарды ала алады және қалдық ПТР өнімдері немесе аэрозольді ластанудан туындаған жалған позитивті күшейтуді тиімді болдырмай, сандық анықтауды дәл орындай алады.Бұл реагент Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad және Roche т.б. сияқты өндірушілердің флуоресцентті сандық ПТР құралдарымен үйлесімді және лиофилденген пішінде жақсы тұрақтылық көрсетеді.
Реагент құрамы
1. 5×HotstartPremix плюс-UNG (Mg2+тегін) (DG)
2. 250 мМ MgCl2
3. 4×лиопротектор (міндетті емес)
Сақтау шарттары
-20℃ температурада ұзақ сақтау;4°C температурада 3 айға дейін сақтауға болады.Қолданар алдында жақсылап араластырыңыз жәнеқайталап мұздату мен ерітуден аулақ болыңыз.
Велосипедпен жүру протоколы
| Процедура | Темп. | Уақыт | Цикл |
| Ас қорыту | 50℃ | 2 мин | 1 |
| Полимеразды белсендіру | 95℃ | 1~5 мин | 1 |
| Денатура | 95℃ | 10~20 с | 40-50 |
| Жылыту және ұзарту | 56~64℃ | 20~60 с | 40-50 |
qPCR сұйық реакциясы Syсабақты дайындау
|
Құрамы |
25μL Көлемі |
50μL Көлемі |
Қорытынды концентрация |
| 5×HotstartPremix плюс-UNG(Мг2+тегін) (DG) | 5 мкл | 10 мкл | 1× |
| 250мМ MgCl2 | 0,45 мкл | 0,9 мкл | 4,5 мм |
| 4×лиопротектор1 | 6,25 мкл | 12,5 мкл | 1× |
| 25×Праймер-зонд қоспасы2 | 1 мкл | 2 мкл | 1× |
| Үлгі ДНҚ3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25 мкл дейін | 50 мкл дейін | —— |
1. Праймерлер үшін 0,2 мкм соңғы концентрация әдетте жақсы нәтиже береді;реакция өнімділігі нашар болса, қажетінше праймер концентрациясын 0,2-1μM диапазонында реттеңіз.Зонд концентрациясы әдетте оңтайлы комбинацияларды табу үшін градиенттік эксперименттер арқылы 0,1-0,3μM диапазонында оңтайландырылған.
2. Шаблондардың әртүрлі типтеріндегі мақсатты гендердің көшірме саны әртүрлі болады;қажет болса, үлгіні қосудың оңтайлы мөлшерін анықтау үшін градиентті сұйылтуды орындауға болады.
3. Бұл жүйені лиофилизациялауға болады;Тұтынушылар бұл жүйені мұздату-кептіру талаптарынсыз пайдаланған кезде, 4 × лиопротекторды таңдаулы түрде қосуға болады; егер мұздатылған кептірілген өнімдер қажет болса, сұйық реагенттер сатысында өнімнің өнімділігін тексеру кезінде лиофилизацияланған жүйе компоненттерімен сәйкестігін қамтамасыз ету үшін ол 4 × лиопротекторды қосуы керек. және әсерлер.
Жүйе пайдаланылған кездеd мұздатып кептіру үшін дайындаңыз жүйесі as келесі:
| Құрамы | 25мкл Реакция жүйесі |
| 5 ×HotstartPremix плюс-UNG (мг2+тегін) (DG) | 5 мкл |
| 250мМ MgCl2 | 0,45 мкл |
| 4×лиопротектор | 6,25 мкл |
| 25×Праймер-зонд қоспасы | 1 мкл |
| ddH2O | 18~20μL дейін |
* Мұздатып кептіруге арналған басқа жүйелер қажет болса, бөлек кеңесіңіз.
Лиофилизация процесіss
| Процедура | Темп. | Уақыт | Шарт | Қысым |
| Алдын ала мұздату | 4℃ | 30 мин | Ұстаңыз |
1 атм |
| -50℃ | 60 мин | Салқындату | ||
| -50℃ | 180 мин | Ұстаңыз | ||
| Бастапқы кептіру | -30℃ | 60 мин | Жылыту |
Соңғы вакуум |
| -30℃ | 70 мин | Ұстаңыз | ||
| Екіншілік кептіру | 25℃ | 60 мин | Жылыту |
Соңғы вакуум |
| 25℃ | 300 мин | Ұстаңыз |
2. Жоғарыда келтірілген лиофилизация процесі тек анықтама үшін ғана берілген.Әртүрлі өнім түрлері мен әртүрлі мұздатқыш кептіргіштердің әртүрлі параметрлері бар, сондықтан нақты параметрлерге сәйкес түзетулер жасауға болады.пайдалану кезіндегі жағдайлар.
3. Әртүрлі лиофилизация процестері лиофилизацияланған өнімдердің әртүрлі көлемдегі партиялары үшін қолайлы болуы мүмкін.өнімдер, сондықтан ауқымды өндіріс үшін пайдаланған кезде жеткілікті сынақ валидациясы жүргізілуі керек.
Лиофилизаны қолдану жөніндегі нұсқаулықd ұнтақ
1. Лиофилденген ұнтақты қысқаша центрифугалаңыз;
2. Лиофилденген ұнтаққа нуклеин қышқылының үлгісін қосып, 25 мкл дейін су қосыңыз;
3. Центрифугалау арқылы жақсылап араластырыңыз және машинада іске қосыңыз.
Сапа бақылауы:
1. Функционалды тестілеу: qPCR сезімталдығы, ерекшелігі, қайталануы.
2. Экзогендік нуклеаза белсенділігі жоқ, экзогендік эндо/экзонуклеаза ластануы жоқ.
Техникалық ақпарат:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG 1~5 минут ішінде жылдам іске қосуға мүмкіндік беретін жаңа ыстық қосу ферментін пайдаланады;арнайы буферлік формула арқылы мультиплексті флуоресцентті сандық ПТР реакциялары үшін қолайлы.
2. Флуоресценцияның сандық ПТР шегін анықтау сезімталдығын айтарлықтай жақсартатын, күшейту қисықтарын қалыпқа келтіретін жоғары спецификаға ие, флуоресценция мәні жоғары сезімталдықты флуоресценцияның сандық ПТР анықтау реагенттері ретінде қолайлы төмен концентрация үлгілерінде айқын жақсартуды алады.
3. Жасыту температурасы төмен немесе фрагменттері 200 бит-тен ұзақ праймерлер үшін 3 қадамды әдіс ұсынылады.
4. dUTP пайдалану тиімділігі мен UNG ферментіне сезімталдық әртүрлі мақсатты гендер үшін ерекшеленеді, сондықтан UNG жүйесін пайдалану анықтау сезімталдығының төмендеуіне әкелсе, реакция жүйесін реттеу және оңтайландыру қажет.Техникалық қолдау қажет болса, біздің компанияға хабарласыңыз.
5. Күшейтуге дейін және одан кейін арнайы аймақтар мен тамшуырларды пайдаланыңыз, жұмыс кезінде қолғап киіңіз және оларды жиі ауыстырыңыз;үлгілердің ПТР өнімдерімен ластануын азайту үшін ПТР аяқталғаннан кейін реакция түтігін ашпаңыз.
