Superstart Taq ДНҚ полимераза
Superstart Taq DNA Polymerase - бұл ыстық басталатын ДНҚ полимераза.Бұл өнім ПТР жүйесін дайындау және күшейту процесінде праймерлердің спецификалық емес жасытуынан немесе праймерді біріктіруден туындаған спецификалық емес реакцияны жақсырақ тежей алмайды.Сондықтан ол бірнеше күшейтуде жақсы нәтижелерге қол жеткізе алады.Сондай-ақ, ол өнімнің жоғары мөлшерін алу және неғұрлым тұрақты және экстремалды күшейту әсеріне қол жеткізу үшін төмен концентрация үлгілерінің күшейтілуін оңтайландыра алады.
Құрамдас бөліктер
1.5 U/мкл Superstart Taq ДНҚ полимеразасы
2.10 × ПТР буфері II (Mg²+ бос) (қосымша)
3.25 мМ MgCl2(міндетті емес)
* 10 × ПТР буфері II (Mg²+ бос) құрамында dNTP және Mg²+ жоқ, dNTP және MgCl қосыңыз.2реакция жүйесін дайындаған кезде.
Ұсынылатын қолданбалар
1.Африкалық шошқа обасын анықтау.
2.ЖЖБИ анықтау.
3.Мультиплексті күшейту.
Сақтау жағдайы
Ұзақ мерзімді сақтау үшін -20°C, қолданар алдында жақсылап араластыру керек, жиі мұздату-ерітуден аулақ болу керек.
*Егер тоңазытқыштан кейін жауын-шашын болса, бұл қалыпты жағдай;араластыру және пайдалану алдында бөлме температурасына теңестіру ұсынылады.
Бірлік анықтамасы
Бір белсенді бірлік (U) шаблон/праймер ретінде белсендірілген лосось шәуетінің ДНҚ-сын пайдаланып, 74°C температурада 30 минут ішінде қышқылда ерімейтін материалға 10 нмоль дезоксирибонуклеотидті қосатын фермент мөлшері ретінде анықталады.
Сапа бақылауы
1.SDS-PAGE электрофоретикалық тазалығы 98%-дан жоғары.
2.Күшейтудің сезімталдығы, партиядан партияға бақылау, тұрақтылық.
3.Экзогендік нуклеаза белсенділігі жоқ, экзогендік эндонуклеаза немесе экзонуклеаза ластануы жоқ
Нұсқаулар
Реакцияны орнату
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Қорытынды концентрация |
| 10 × ПТР буфері II (Mg²+ бос)a | 5 | 1× |
| dNTP (әрбір dNTP 10 мМ) | 1 | 200 мкм |
| 25 мМ MgCl2 | 2-8 | 1-4 мМ |
| Superstart Taq ДНҚ полимераза (5U/мкл) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Праймер қоспасыб | 2 | 1× |
| Үлгі | - | ＜ 1 мкг/реакция |
| ddH2O | 50-ге дейін | - |
Ескертулер:
1) а.Буферде dNTP және Mg²+ жоқ, dNTP және MgCl қосыңыз2реакция жүйесін дайындаған кезде.
2) b. qPCR/qRT-PCR үшін пайдаланылса, реакция жүйесіне флуоресцентті зондтарды қосу керек.Әдетте, 0,2 мкМ түпкілікті праймер концентрациясы жақсы нәтиже береді;реакция өнімділігі нашар болса, праймер концентрациясын 0,2-1 мкМ диапазонында реттеуге болады.Зонд концентрациясы
3) әдетте 0,1-0,3 мкМ диапазонында оңтайландырылған.Праймер мен зондтың ең жақсы комбинациясын табу үшін концентрация градиенті эксперименттерін жүргізуге болады.
Термиялық цикл протоколы
| Екі сатылы процесс | |||
| Қадам | Температура | Уақыт | Циклдер |
| Алдын ала денатурация | 95℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10-20 сек | 35-50 |
| Күйдіру / ұзарту | 56-64℃ | 20-60 сек | |
| Tүш- сатылы процесс | |||
| Қадам | Температура | Уақыт | Циклдер |
| Алдын ала денатурация | 95℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10-20 сек | 35-50 |
| Күйдіру | 56-64℃ | 10-30 сек | |
| Кеңейтім | 72℃ | 10-60 сек | |
Ескертпелер
1.Ол 95 ℃ немесе 94 ℃, 1 ~ 5 минут жылдам ыстық бастауды қабылдай алады.
2.Жүйе жоғары спецификалық және сезімталдықпен жоғары бейімделгіш.
3.Қалыпты ПТР кезінде ол өнімнің үлкен мөлшерін ала алады, ал флуоресценциялық сандық ПТР-де ол күшейту қисығының қалыпқа келуін және өте төмен концентрациядағы шаблонның флуоресценция мәнін жақсарта алады.Жоғары сезімталдық ПТР анықтау реагенті ретінде пайдалануға жарамды.
4.және мультиплексті ПТР күшейту реакцияларында қолдануға болады.
5.5′→3′ полимераза белсенділігі, 5′→3′ экзонуклеаза белсенділігі;3′→5′ экзонуклеаза белсенділігі жоқ;түзету функциясы жоқ.
6.ПТР және RT-ПТР сапалық және сандық тестілеуге жарамды.
7.ПТР өнімінің 3′ соңы A болып табылады, оны тікелей Т векторына клондауға болады.
8.Үш сатылы әдіс жасыту температурасы төмен праймерлер үшін немесе 200 бит-тен ұзын фрагменттерді күшейту үшін ұсынылады.
