Multiplex qPCR Probe Premix
Мысықтың №: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Бояғыш негізінде) – көк түсті, жоғары сезімталдықпен және ерекшелікпен сипатталатын және үлгі қосу әсері бар нақты уақыттағы 2 × сандық ПТР күшейтуге арналған алдын ала ерітінді.Бұл өнім бір реакциялық ұңғымада төрт флуоресцентті сандық ПТР реакцияларына мүмкіндік беретін 2× алдын ала араластырылған реагент болып табылады.Бұл өнімде күшейту сезімталдығы мен ерекшелігін айтарлықтай жақсартатын Taq ферментінің ыстық басталуына арналған генетикалық түрлендірілген антиденелер әдісі бар.Сонымен қатар, бұл өнім реакцияның күшейту тиімділігін арттыратын және төмен концентрациялы үлгілердің тиімді күшейтілуіне ықпал ететін көп реакциялық буферді терең оңтайландырды.Бұл өнімді генотиптеу және мультиплекстік сандық талдау үшін пайдалануға болады.
Техникалық сипаттама
| Ыстық бастау | Кіріктірілген ыстық бастау |
| Анықтау әдісі | Праймер-зондты анықтау |
| ПТР әдісі | qPCR |
| Полимераз | Так ДНҚ полимераза |
| Үлгі түрі | ДНҚ |
Сақтау шарттары
Өнім құрғақ мұзбен жеткізіледі және оны -25~-15℃ температурада 2 жыл сақтауға болады.
Нұсқаулар
1. РеакцияЖүйе
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Қорытынды концентрация |
| 2× TaqMan мультиплекс qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Праймер қоспасы (10 мкмоль/л) a | × | 0,1 - 0,5 мкмоль/л |
| Зонд қоспасы (10 мкмоль/л)b | × | 50 - 250 нмоль/л |
| Rox сілтеме бояуы | 0,5 | 1× |
| Үлгі ДНҚ/кДНҚ | 1-10 | - |
| ddH2O | 25-ке дейін | - |
Ескертулер:Қатты шайқаудан шамадан тыс көпіршіктерді болдырмау үшін қолданар алдында мұқият араластырыңыз.
а.Праймер концентрациясы: Primer Mix құрамында бірнеше жұп праймер бар, әдетте әрбір праймер соңғы концентрациясы 0,2 мкмоль/л және де сәйкесінше 0,1 мен 0,5 мкмоль/л арасында реттеуге болады.
б.Зонд концентрациясы: Зонд қоспасы әртүрлі флуоресценция сигналдары бар бірнеше зондтарды қамтиды және әрбір зондтың концентрациясын нақты жағдайға сәйкес 50 және 250 нмоль/л арасында реттеуге болады.
1.Rox бояуының анықтамасы: Ол ұңғымалар арасында жасалған флуоресценция сигналының қателігін түзету үшін Applied Biosystems сияқты нақты уақыттағы ПТР күшейту құралында қолданылады;бұл өнімде Rox бояу сілтемесі жоқ.Қажет болса, Cas#10200 ұсынылады.
2.Үлгіні сұйылту: qPCR өте сезімтал, сондықтан үлгіні пайдалану үшін сұйылту ұсынылады.Үлгі cDNA қор ерітіндісі болса, үлгі көлемі жалпы көлемнің 1/10 бөлігінен аспауы керек.
3.Реакция жүйесі: мақсатты генді күшейтудің тиімділігі мен қайталануын қамтамасыз ету үшін 25 мкл, 30 мкл немесе 50 мкл ұсынылады.
4.Жүйені дайындау: Өте таза орындықта дайындалыңыз және нуклеаза қалдығы жоқ ұштарды және реакция түтіктерін пайдаланыңыз;сүзгі картридждері бар ұштарды пайдалану ұсынылады.Айқас ластанудан және аэрозольмен ластанудан аулақ болыңыз.
2.Реакция бағдарламасы
| Цикл қадамы | Темп. | Уақыт | Циклдер |
| Бастапқы денатурация | 95 ℃ | 5мин | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 15сек | 45 |
| Күйдіру/кеңейту | 60 ℃ | 30сек |
Ескертулер:
1.Күйдіру/кеңейту: Температура мен уақытты жобаланған праймердің Tm мәніне сәйкес дұрыс реттеуге болады.
2.Флуоресценция сигналын алу: әртүрлі qPCR анықтау құралдары үшін қажет флуоресценция сигналын алу уақыты әртүрлі, ең аз уақыт шегіне сәйкес орнатыңыз.Бірнеше жалпы құралдардың уақыты келесідей белгіленеді:
20 сек: қолданбалы биожүйелері 7700, 7900HT, 7500 жылдам
31 сек: Қолданбалы биожүйелер 7300
32 сек: Қолданбалы биожүйелер 7500
Ескертпелер
Сіздің денсаулығыңыз бен қауіпсіздігіңізді қамтамасыз ету үшін қажетті ЖҚҚ, зертханалық халат пен қолғап киіңіз!
