Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Мысықтың №: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR зонд жинағы (UDG Plus) – үлгі ретінде РНҚ негізіндегі мультиплексті сандық ПТР жинағы.Эксперимент процесінде кері транскрипция және сандық ПТР бір түтікте жүргізілді, бұл тәжірибелік операцияны жеңілдетіп, ластану қаупін азайтты.Бұл жинақта бірінші cDNA тізбегі ыстыққа төзімді Кері транскриптаза арқылы тиімді синтезделді және HotStart Tag DNA Polymerase арқылы сандық түрде күшейтілді.Жинақта негізінен оңтайландырылған MP буфері, ферменттер қоспасы және т.б. бар. Буферлік ерітіндіде Mg бар.2+және dNTP.Сонымен қатар, спецификалық емес ПТР күшейтуін тиімді тежейтін және бірнеше qPCR реакцияларының күшейту тиімділігін жақсартатын факторлар қосылады, олар күшейту тиімділігін қамтамасыз етеді және бірнеше күшейту реакциясына дейін жүзеге асырады.dUTP/UDG жүйесі аэрозольмен ластану қаупін тиімді болдырмау үшін қосылды.
Құрамдас бөліктер
1. Буфер
2. Фермент қоспасы
Техникалық сипаттама
| Ыстық бастау | Кіріктірілген ыстық бастау |
| Анықтау әдісі | Праймер-зондты анықтау |
| ПТР әдісі | Бір қадамды RT-qPCR |
| Полимераз | Так ДНҚ полимераза |
| Үлгі түрі | ДНҚ |
Сақтау шарттары
Өнім құрғақ мұзбен жеткізіледі және оны -25~-15℃ температурада 1 жыл сақтауға болады.Оны жиі болдырмау керекмұздату-еріту.Бөлек сақтау ұсынылады.
Нұсқаулар
1.Реакция Жүйе
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Қорытынды концентрация |
| 2 × МП буфер | 12.5 | 1× |
| Фермент қоспасы | 1 | - |
| Праймер/зонд қоспасы (2,5 мкм) | 3 | 0,3 мкм |
| Үлгі РНҚ | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | 25-ке дейін | - |
Ескертулер:
Қолданар алдында жақсылап араластырыңыз, қатты дірілден туындаған шамадан тыс көпіршіктерден аулақ болыңыз.
а.Праймер концентрациясы: жағдайға байланысты 0,1 және 1,0 мкм арасында болуы мүмкін оптималды праймер концентрациясы мультиплексті праймерді қамтитын праймер қоспасы.
б.Зонд концентрациясы: жағдайға байланысты 0,05 және 0,5 мкм аралығында болуы мүмкін зондтың оңтайлы концентрациясы болуы мүмкін, мультиплексті зонд таңбалау айырмашылығы флуоресцентті топты қамтитын зонд қоспасы.
в.Үлгіні сұйылту: qPCR өте сезімтал және үлгіні сұйылту ұсынылады.Басқару Ct мәні 20 мен 35 арасында қолайлы.
d.Жүйені дайындау: өте таза жұмыс үстеліне, тамшуырға және нуклеаза қалдығы жоқ реакция түтігіне дайындаңыз;сүзгі элементі бар мылтық басын пайдалану ұсынылады.Айқас ластанудан және аэрозольмен ластанудан аулақ болыңыз.
2. Оңтайландырылған велосипед тебуПротокол
| Цикл қадам | Темп. | Уақыт | Циклдер |
| Кері транскрипция | 50℃а | 20мин | 1 |
| Бастапқы денатурация | 95℃ | 5мин | 1 |
| Күшейту реакциясы | 95℃ | 15сек |
40-45 |
| 60℃ b | 30сек c |
Ескертулер:
а.Кері транскрипция: Температура 42°C немесе 50°C таңдай алады.
б.Күшейту реакциясы: Температура жобаланған праймерлердің Tm мәніне сәйкес реттеледі.
в.Флуоресценция сигналын алу: Эксперименттік процедураны құрал нұсқаулығының талаптарына сәйкес орнатыңыз.
Ескертпелер
Сіздің денсаулығыңыз бен қауіпсіздігіңізді қамтамасыз ету үшін зертханалық халат пен қолғап сияқты қажетті ЖҚҚ киіңіз.
