Әмбебап SYBR GREEN qPCR премиксі (көк)
Мысықтың №: HCB5041B
Әмбебап көк qPCR негізгі қоспасы (бояғыш негізінде) жоғары сезімталдықпен және ерекшелікпен сипатталатын, көк түсті және үлгіні қосуды бақылау әсеріне ие 2 × нақты уақыттағы сандық ПТР күшейтуге арналған алдын ала ерітінді.Негізгі құрамдас Taq ДНҚ полимеразасы үлгіні дайындау кезінде праймердің жасытуына байланысты спецификалық емес күшейтуді тиімді тежеу үшін антиденелерді ыстық бастауды пайдаланады.Сонымен қатар, формула ПТР реакциясының күшейту тиімділігін арттыру және әртүрлі GC мазмұны бар гендердің күшейтуін теңестіру (30 ~ 70%) үшін ықпал ететін факторларды қосады, осылайша сандық ПТР кең санда жақсы сызықтық қатынасты ала алады. аймақ.Бұл өнімде qPCR құралдарының көпшілігіне қолданылатын арнайы ROX пассивті анықтамалық бояуы бар.Әр түрлі аспаптарда ROX концентрациясын реттеу қажет емес.Күшейтуге реакция жүйесін дайындау үшін тек праймерлер мен шаблондарды қосу қажет.
Құрамдас бөліктер
Universal Blue qPCR Master Mix
Сақтау шарттары
Өнім мұз пакеттерімен бірге жеткізіледі және оны -25℃~-15℃ температурада 18 ай бойы сақтауға болады.Реакциялық жүйені сақтау немесе дайындау кезінде күшті жарық сәулеленуін болдырмау қажет.
Техникалық сипаттама
| Шоғырлану | 2× |
| Анықтау әдісі | SYBR |
| ПТР әдісі | qPCR |
| Полимераз | Так ДНҚ полимераза |
| Үлгі түрі | ДНҚ |
| Қолданбалы жабдық | Көптеген qPCR құралдары |
| Өнім түрі | Нақты уақыттағы флуоресцентті сандық ПТР үшін SYBR премиксі |
| Қолдану (өтінім) | Ген экспрессиясы |
Нұсқаулар
1.Реакция жүйесі
| Құрамдас бөліктер | Көлемі(μL） | Көлемі(μL） | Қорытынды концентрация |
| Әмбебап SYBR GREEN qPCR премиксі | 25 | 10 | 1× |
| Алға арналған праймер (10мкмоль/л) | 1 | 0.4 | 0,2 мкмоль/л |
| Кері праймер (10мкмоль/л) | 1 | 0.4 | 0,2 мкмоль/л |
| ДНҚ | X | X | |
| ddH2O | 50-ге дейін | 20-ға дейін | - |
[Ескертпе]: Қатты шайқаудан шамадан тыс көпіршіктерді болдырмау үшін қолданар алдында мұқият араластырыңыз.
a) Праймер концентрациясы: түпкілікті праймер концентрациясы 0,2 мкмоль/л және оны қажетінше 0,1 мен 1,0 мкмоль/л арасында реттеуге болады.
b) Үлгі концентрациясы: Егер үлгі сұйылтылмаған cDNA ерітіндісі болса, пайдаланылатын көлем qPCR реакциясының жалпы көлемінің 1/10 бөлігінен аспауы керек.
c) Үлгі сұйылту: cDNA қор ерітіндісін 5-10 есе сұйылту ұсынылады.Қосылған үлгінің оңтайлы мөлшері күшейту арқылы алынған Ct мәні 20-30 цикл болғанда жақсырақ болады.
d) Реакция жүйесі: Мақсатты генді күшейтудің тиімділігі мен қайталануын қамтамасыз ету үшін 20 мкл немесе 50 мкл пайдалану ұсынылады.
e) Жүйені дайындау: Өте таза орындықта дайындалыңыз және нуклеаза қалдығы жоқ ұштарды және реакция түтіктерін пайдаланыңыз;сүзгі картридждері бар ұштарды пайдалану ұсынылады.Айқас ластанудан және аэрозольмен ластанудан аулақ болыңыз.
2.Реакция бағдарламасы
Стандартты бағдарлама
| Цикл қадамы | Темп. | Уақыт | Циклдер |
| Бастапқы денатурация | 95℃ | 2 мин | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10 сек | 40 |
| Күйдіру/кеңейту | 60℃ | 30 сек★ | |
| Балқу қисығының кезеңі | Құралдың әдепкі параметрлері | 1 | |
Жылдам бағдарлама
| Цикл қадамы | Темп. | Уақыт | Циклдер |
| Бастапқы денатурация | 95℃ | 30 сек | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 3 сек | 40 |
| Күйдіру/кеңейту | 60℃ | 20 сек★ | |
| Балқу қисығының кезеңі | Құралдың әдепкі параметрлері | 1 | |
[Ескертпе]: Жылдам бағдарлама гендердің басым көпшілігі үшін жарамды, ал стандартты бағдарламаларды жеке күрделі қайталама құрылым гендеріне қолдануға болады.
a) Күйдіру температурасы мен уақыты: праймер мен мақсатты геннің ұзындығына сәйкес реттеңіз.
b) Флуоресценция сигналын алу (★): Эксперименттік процедураны құралды пайдалану нұсқауларындағы талаптарға сәйкес орнатыңыз.
c) Балқу қисығы: Құралдың әдепкі бағдарламасын қалыпты түрде пайдалануға болады.
3. Нәтижені талдау
Сандық эксперименттер үшін кем дегенде үш биологиялық қайталау қажет болды.Реакциядан кейін күшейту қисығы мен балқу қисығын растау қажет.
3.1 Күшейтудің қисығы:
Стандартты күшейту қисығы S-тәрізді.Сандық талдау Ct мәні 20 мен 30 аралығына түскенде дәлірек болады. Егер Ct мәні 10-нан аз болса, үлгіні сұйылту және сынақты қайтадан өткізу қажет.Ct мәні 30-35 аралығында болғанда күшейту тиімділігін арттыру және нәтиже талдауының дәлдігін қамтамасыз ету үшін шаблон концентрациясын немесе реакция жүйесінің көлемін арттыру қажет.Ct мәні 35-тен жоғары болғанда, сынақ нәтижелері геннің экспрессиясын сандық түрде талдай алмайды, бірақ сапалы талдау үшін пайдаланылуы мүмкін.
3.2 Балқу қисығы:
Балқу қисығының жалғыз шыңы реакция ерекшелігінің жақсы екенін және сандық талдауды жүргізуге болатынын көрсетеді;егер балқу қисығы қос немесе бірнеше шыңдарды көрсетсе, сандық талдауды орындау мүмкін емес.Балқу қисығы қос шыңдарды көрсетеді және мақсатты емес шыңның праймер димері немесе ДНҚ агарозды гель электрофорезі арқылы спецификалық емес күшейту екенін анықтау қажет.Егер бұл праймер димері болса, онда праймер концентрациясын азайту немесе жоғары күшейту тиімділігі бар праймерлерді қайта құру ұсынылады.Егер бұл спецификалық емес күшейту болса, жасыту температурасын арттырыңыз немесе праймерлерді ерекшелікпен қайта жасаңыз.
Ескертпелер
Сіздің денсаулығыңыз бен қауіпсіздігіңізді қамтамасыз ету үшін қажетті ЖҚҚ, зертханалық халат пен қолғап киіңіз！
Бұл өнім тек зерттеуге арналған!
