Multiplex One Step RT-qPCR Premix
Сипаттама
Мысықтың №: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix – үлгі ретінде РНҚ негізіндегі мультиплексті сандық ПТР жинағы.Экспериментте кері транскрипция және сандық ПТР бір реакциялық түтікте орындалады, бұл эксперименттік операцияны жеңілдетеді және ластану қаупін азайтады.Буфер мен фермент қоспасының бірегей дизайны бір сатылы лиофилизацияланған жүйеде қолданылуы мүмкін.Жинақ сандық күшейту үшін hotstart Taq DNA Polymerase көмегімен бірінші тізбекті cDNA тиімді синтезі үшін ыстыққа төзімді Кері транскриптазаны пайдаланады.Оның құрамында оңтайландырылған реакция буфері, ферменттер қоспасы және т.б. және спецификалық емес ПТР күшейтуін тиімді тежейтін және бірнеше qPCR реакцияларының күшейту тиімділігін арттыратын факторлар қосылды, бұл праймерлердің күшейту тиімділігін қамтамасыз ете отырып, бірнеше флуоресцентті сандық күшейтуге мүмкіндік береді.
Құрамдас бөліктер
| Аты |
| 1. Лио-буфер |
| 2. Лио-фермент қоспасы |
| 3. Лио қорғанысы |
Тасымалдау жағдайыион
A: Лио-буфер және қорғағыш: -25~-15℃, сақтау мерзімі 1 жыл.
B: лио-фермент қоспасы, 2-8 ℃, сақтау мерзімі 6 ай.
Жұмысқа арналған нұсқаулық
1. Реакция жүйесі (мысал ретінде 25 мкл алыңыз)
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Қорытынды концентрация |
| Лио-буфер | 6 | 1* |
| Лио-фермент қоспасы | 1 | - |
| Лио-қорғаушы | 8 | - |
| Праймер қоспасы (10 мкм) | 1 | 0,1- 1uM |
| Зонд қоспасы (10 мкм) | 0,5 | 0,05-0,5 мкм |
| РНҚ үлгісі | 5 | - |
| DEPC H2O | 25-ке дейін | - |
2. Оңтайландырылған Cycling Protocol
1) Стандартты велосипед протоколы
| Реакция кезеңі | Температура | Уақыт | Цикл | |
| 1 | Кері транскрипция | 50°Ca | 10 мин | 1 |
| 2 | Бастапқы денатурация | 95°C | 5 мин | 1 |
| 3 | Күшейту реакциясы | 95°C | 15сек | 45 цикл |
| 60°Cb | 30секc |
2) Fast Cycling Protocol
|
| Реакция кезеңі | Температура | Уақыт | Цикл |
| 1 | Кері транскрипция | 50°Ca | 2мин | 1 |
| 2 | Бастапқы денатурация | 95°C | 2сек | 1 |
| 3 | Күшейту реакциясы | 95°C | 1сек |
45 цикл |
| 60°Cb | 13секc |
Ескерту:
a) Кері транскрипция: Температура 10-15 минут ішінде 42°C немесе 50°C таңдай алады.
b) Күшейту реакциясы: Температура жобаланған праймерлердің Tm мәніне сәйкес реттеледі.
в)Флуоресценция сигнал сатып алу: Тәжірибелік процедураны талаптарға сәйкес орнатыңызқұрал нұсқаулығы.
Техникалық ақпарат/спецификациялар
| Ыстық бастау | Кіріктірілген ыстық бастау |
| Анықтау әдісі | Праймер-зондты анықтау |
| ПТР әдісі | Бір қадамды RT-qPCR |
| Үлгі түрі | РНҚ |
Ескертпелер
1. Бұл өнім тек зерттеуге арналған.
2. Сіздің денсаулығыңыз бен қауіпсіздігіңізді қамтамасыз ету үшін қажетті ЖҚҚ, зертханалық халат пен қолғапты киіңіз！
