Рназа А
Рибонуклеаза А (RNaseA) – молекулалық салмағы шамамен 13,7 кДа болатын 4 дисульфидтік байланысы бар бір тізбекті полипептид.RNase A - C және U қалдықтарында бір тізбекті РНҚ-ны ыдырататын эндорибонуклеаза.Нақтырақ айтқанда, бөліну нуклеотидтің 5′-рибозасы мен іргелес пиримидин нуклеотидінің 3′-рибозасындағы фосфат тобымен түзілген фосфодиэфирлік байланысты таниды, осылайша 2, 3′-циклдік фосфаттар сәйкес 3-ге гидролизденеді. ′нуклеозид фосфаттары (мысалы, pG-pG-pC-pA-pG pG-pG-pCp және A-PG генерациялау үшін RNase A арқылы бөлінеді).RNase A бір тізбекті РНҚ-ны ыдыратуда ең белсенді болып табылады.Ұсынылатын жұмыс концентрациясы 1-100 мкГ/мл, әртүрлі реакция жүйелерімен үйлесімді.Тұздың төмен концентрациясы (0-100 мМ NaCl) РНҚ-ДНҚ гибридизациясы нәтижесінде түзілген бір тізбекті РНҚ, екі тізбекті РНҚ және РНҚ тізбектерін кесу үшін пайдаланылуы мүмкін.Алайда жоғары тұз концентрациясында (≥0,3 М) RNase A тек бір тізбекті РНҚ-ны ыдыратады.
RNase A көбінесе плазмидтік ДНҚ немесе геномдық ДНҚ дайындау кезінде РНҚ-ны жою үшін қолданылады. ДНҚ-ның дайындық процесі кезінде белсенді болуы немесе болмауы реакцияға оңай әсер етуі мүмкін.DNase белсенділігін инактивациялау үшін су моншасында қайнатудың дәстүрлі әдісін қолдануға болады.Бұл өнімде DNase және протеаза жоқ және қолданар алдында термиялық өңдеуді қажет етпейді.Бұған қоса, бұл өнімді RNase қорғау талдауы және РНҚ реттілігін талдау сияқты молекулалық биология эксперименттерінде де пайдалануға болады.
Сақтау шарттары
Өнімді -25～-15℃ температурада сақтауға болады, жарамдылық мерзімі 2 жыл.
Нұсқаулар
Бұл RNase A сақтау ерітіндісін дайындаудың жалпы әдістерінің бірі.Оны да дайындауға боладызертханалық немесе анықтамалық әдебиеттегі дәстүрлі әдістерге сәйкес басқа әдістер (мысалы10 мМ Tris-HCl, pH 7,5 немесе Tris-NaCl ерітіндісінде тікелей ериді)
1. 10 мг/мл RNase A сақтау ерітіндісін дайындау үшін 10 мМ натрий ацетатын (рН 5,2) пайдаланыңыз.
2. 100 ℃ температурада 15 минут қыздыру
3. Бөлме температурасына дейін суытып, көлемінің 1/10 бөлігін 1 М Tris-HCl (рН 7,4) қосыңыз, оның рН мәнін 7,4-ке реттеңіз (үшінмысалы, 500 мл 10г/мл RNase сақтау ерітіндісін қосыңыз 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. 2 жылға дейін тұрақты болуы мүмкін мұздатылған сақтау үшін -20℃ температурада қосалқы қаптамада.
[Ескертпелер]: RNaseA ерітіндісін бейтарап жағдайда қайнатқанда RNase тұнбасы пайда болады;Оны рН төменірек қайнатыңыз, егер жауын-шашын болса, оны байқауға болады, бұл ақуыз қоспаларының болуынан туындауы мүмкін.Егер қайнағаннан кейін шөгінді табылса, қоспаларды жоғары жылдамдықтағы центрифугалау (13000 айн/мин) арқылы алып тастауға болады, содан кейін мұздату үшін қосымша буып-түйуге болады.
Өнім туралы ақпарат
| Синонимдер | Рибонуклеаза I;Панкреатикалық рибонуклеаза;Рибонуклеаза 3'-пиримидноолигонуклеотидоидролаза;Rnase A;Эндорибонулцеаза I |
| CAS нөмірі | 9001-99-4 |
| Сыртқы түрі | Ақ лиофилденген ұнтақ |
| Молекулалық салмақ | ~ 13,7кДа (аминқышқылдарының реттілігі) |
| Ph мәні | 7.6 (әрекеттер ауқымы 6-10) |
| Қолайлы температура | 60℃ (Әрекет диапазоны 15-70℃) |
| Белсендендіруші агент | Na2+.Қ+ |
| Ингибитор | Рназа ингибиторы |
| Инактивация әдісі | Қыздыру арқылы инактивацияланбайды, центрифуга колонкасын пайдалану ұсынылады |
| Шығу тегі | Ірі қара |
| Ерігіштік | Суда ериді (10 мг/мл) |
| Құрғақтағы жоғалту | ≤5,0% |
| Фермент белсенділігі | ≥60 Куниц бірлігі/мг |
| Изоэлектрлік нүкте | 9.6 |
Ескертпелер
Қауіпсіздігіңіз бен денсаулығыңыз үшін зертханалық халат пен жұмыс кезінде бір рет қолданылатын қолғап киіңіз.
