One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Мысықтың №: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix SYBR Green I бояуына негізделген флуоресценция мөлшерін анықтауға арналған.Гене-спецификалық праймерлерді қолдану арқылы кері транскрипция және qPCR реакциялары бір түтікте аяқталады, бұл қақпақты қайталап ашу және тамшуырлау операцияларының қажеттілігін жояды, талдау тиімділігін айтарлықтай арттырады және ластану қаупін азайтады.РНҚ үлгілері үшін жинақта тиімді cDNA синтезі үшін ыстыққа төзімді Кері транскриптаза және сандық күшейту үшін HotStart Taq ДНҚ полимераза қолданылады.Оңтайландырылған буферлік жүйеде жинақтың сезімталдығы жоғары дәрежеде көрсетілген мақсаттар үшін 0,1 пг дейін және қалыпты түрде көрсетілген мақсаттар үшін 1 пг дейін жоғары болуы мүмкін.Жинақ ДНҚ үлгілерін күшейту және сандық анықтау үшін жарамды.Ол әртүрлі өсімдіктер мен жануарлар үлгілерінен, жасушалар мен микроорганизмдерден нуклеин қышқылдарын сезімтал анықтауға және олардың мөлшерін анықтауға мүмкіндік береді.
Құрамдас бөліктер
| No | Аты | Көлемі | Көлемі |
| 1 | Жетілдірілген буфер | 250 мкл | 2×1,25 мл |
| 2 | Жетілдірілген ферменттер қоспасы | 20 мкл | 200 мкл |
| 3 | RNase Free H2O | 250 мкл | 2×1,25 мл |
Сақтау шарттары
Бұл өнімді -25~-15℃ жарықтан алыс жерде 1 жыл бойы сақтау керек.
Нұсқаулар
1.Реакция жүйесінің конфигурациясыd
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Көлемі (мкл) | Соңғы концентрация |
| Жетілдірілген буфер | 12.5 | 25 | 1× |
| Жетілдірілген ферменттер қоспасы | 1 | 2 | - |
| Форвард праймер (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| Кері праймер (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| РНҚ тамплатасыb | X | X | - |
| RNase Free H2Оc | 25-ке дейін | 50-ге дейін | - |
Ескертулер:
1) а.Тол түпкілікті праймер концентрациясы 0,2 мкмоль/л болды, оны да сәйкесінше 0,1 және 1 мкмоль/л арасында реттеуге болады.
2) б.Реагент өте сезімтал, жалпы РНҚ 1pg-1μg диапазонында және адам үлгілерін сынау 15-30 диапазонындағы жалпы Ct мәнін бақылай отырып, оңтайлы 1 pg-100 нг енгізуді көрсетті.
3) в.Мақсатты генді күшейтудің жарамдылығы мен қайталану мүмкіндігін қамтамасыз ету үшін 20 мкл немесе 50 мкл пайдалану ұсынылады.
4) d.Өте таза орындыққа дайындалыңыз және нуклеаза қалдығы жоқ ұштарды және реакция түтіктерін пайдаланыңыз;сүзгі картридждері бар кеңестер ұсынылады.Айқас ластанудан және аэрозольмен ластанудан аулақ болыңыз.
2.Реакция бағдарламасы
| Цикл қадамы | Темп. | Уақыт | Циклдер |
| Кері транскрипция | 50℃a | 6 мин | 1 |
| Бастапқы денатурация | 95℃ | 5мин | 1 |
| Күшейту реакциясы | 95℃ | 15 сек | 40 |
| 60℃b | 30 сек | ||
| Балқу қисығының кезеңі | Құралдың әдепкі параметрлері | 1 | |
Ескертулер:
1) а.Кері транскрипция температурасын эксперименттік қажеттіліктерге сәйкес 50-55°C аралығында таңдауға болады.ДНҚ үлгілері үшін кері транскрипция процесін өткізіп жіберуге болады.
2) б.Ерекше жағдайларда күйдіру/ұзарту температурасын праймердің Tm мәніне сәйкес реттеуге болады, 60°C ұсынылады.
Ескертпелер
1. Бұл өнім тек зерттеуге арналған.
2. Қауіпсіздігіңіз үшін зертханалық халатпен және бір рет қолданылатын қолғаппен жұмыс жасаңыз.
