Рназа ингибиторы (глицеринсіз)
Тышқан RNase ингибиторы - E.coli-ден экспрессияланған және тазартылған рекомбинантты тышқан RNase ингибиторы.Ол ковалентті емес байланыс арқылы RNase A, B немесе C 1:1 қатынасында байланысады, осылайша үш ферменттің белсенділігін тежейді және РНҚ-ны деградациядан қорғайды.Дегенмен, ол RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H немесе Aspergillus RNase-ге қарсы тиімді емес.Муриндік RNase тежегіші RT-PCR, RT-qPCR және IVT mRNA арқылы сыналған және әртүрлі коммерциялық кері транскриптазалармен, ДНҚ полимеразаларымен және РНҚ полимеразаларымен үйлесімді болды.
Адамның RNase тежегіштерімен салыстырғанда, тышқан RNase тежегішінде ингибитордың инактивациясын тудыратын тотығуға жоғары сезімтал екі цистеин жоқ.Бұл оны DTT төмен концентрацияларында (1 мМ-ден аз) тұрақты етеді.Бұл мүмкіндік оны DTT жоғары концентрациясы реакцияға теріс әсер ететін реакцияларда қолдануға жарамды етеді (мысалы, нақты уақыттағы RT-ПТР).
Aқолдану
Бұл өнімді РНҚ деградациясын болдырмау үшін RNase кедергісі мүмкін болатын кез келген тәжірибеде кеңінен қолдануға болады, мысалы:
1.Бірінші тізбекті кДНҚ синтезі, RT-PCR, RT-qPCR және т.б.;
2. РНҚ-ны in-vitro транскрипциясы/трансляциясы деградациядан қорғау (мысалы, in vitro вирустық репликация);
3.РНҚ-ны бөліп алу және тазарту кезінде РНҚ белсенділігін тежеу.
Сақтау шарттары
-25～-15℃ температурада сақтаңыз;
мұздату-еріту циклдары ≤ 5 рет;
1 жылға жарамды.
Бірлік анықтамасы
Бір бірлік 5 нг RNase A белсенділігін 50% тежеу үшін қажетті RNase тежегішінің мөлшері ретінде анықталады.
Молекулалық салмақ
RNase ингибиторы (глицеринсіз) - 50 кДа ақуыз.
Сапа бақылауы
Экзонуклеаза Белсенділік:
40 U ферментті 1 мкг λ-Hind III дайджест ДНҚ-мен 16 сағат бойы 37°C температурада инкубациялау гельдік электрофорез арқылы анықталған ДНҚ-ның анықталатын деградациясына әкелмеді.
Эндонуклеаза белсенділігі:
40 U ферментті 1 мкг λ ДНҚ-мен 16 сағат бойы 37°C температурада инкубациялау гельдік электрофорез арқылы анықталған ДНҚ-ның анықталатын деградациясына әкелмеді.
Никлеу Белсенділік:
40 U ферментті 1 мкг pBR322 бар 16 сағат бойы 37℃ температурада инкубациялау гель электрофорезімен анықталғандай ДНҚ-ның анықталатын деградациясына әкелмеді.
RNase Белсенділік:
40 U ферментті 1,6 мкг MS2 РНҚ-мен 4 сағат бойы 37℃ температурада инкубациялау гель электрофорезі арқылы анықталған РНҚ-ның анықталатын деградациясына әкелмеді.
E.coli ДНҚ:
40 U фермент TaqMan qPCR арқылы анықталады.E.coli ДНҚ ≤ 0. 1pg/40U.
Nотеs
1. Фермент инактивациясын болдырмау үшін шайқамаңыз немесе қатты араластырмаңыз.
2.RNase ингибиторы 25℃ мен 55℃ аралығындағы температурада белсенді және ≥65℃ температурада белсенді емес.
3. RNase H, RNase 1 және RNase T1 белсенділігі тежелмейді.
4. RNase белсенділігін тежеуге арналған рН диапазоны кең (рН 5-9 кезінде белсенді), рН 7-8 кезінде максималды белсенділікті көрсетеді.
