Рназа А
Рибонуклеаза A(RNaseA) – молекулалық салмағы шамамен 13,7 кДа болатын 4 дисульфидтік байланысы бар бір тізбекті полипептид.RNase A - C және U қалдықтарында бір тізбекті РНҚ-ны ыдырататын эндорибонуклеаза.Атап айтқанда, бөліну нуклеотидтің 5'-рибозасы мен көрші пиримидин нуклеотидінің 3'-рибозасындағы фосфат тобымен түзілген фосфодиэфирлік байланысты таниды, осылайша 2,3'-циклдік фосфаттар сәйкес 3-ге гидролизденеді. 'нуклеозид фосфаттары (мысалы, pG-pG-pC-pA-pG pG-pG-pCp және A-PG генерациялау үшін RNase A арқылы бөлінеді).RNase A бір тізбекті РНҚ-ны ыдыратуда ең белсенді болып табылады.Ұсынылатын жұмыс концентрациясы 1-100 μ Г/мл, әртүрлі реакция жүйелерімен үйлесімді.Тұздың төмен концентрациясы (0-100 мМ NaCl) РНҚ-ДНҚ гибридизациясы нәтижесінде түзілген бір тізбекті РНҚ, екі тізбекті РНҚ және РНҚ тізбектерін кесу үшін пайдаланылуы мүмкін.
Алайда, жоғары тұз концентрациясында (≥0,3 М) RNase A тек бір тізбекті РНҚ-ны ыдыратады.
RNase A плазмидті ДНҚ немесе геномдық ДНҚ дайындау кезінде РНҚ-ны жою үшін жиі қолданылады.Дайындалу процесінде DNase белсенді болуы немесе жоқтығы реакцияға оңай әсер етуі мүмкін.DNase белсенділігін инактивациялау үшін су моншасында қайнатудың дәстүрлі әдісін қолдануға болады.Бұл өнімде DNase және протеаза жоқ және қолданар алдында термиялық өңдеуді қажет етпейді.Бұған қоса, бұл өнімді RNase қорғау талдауы және РНҚ реттілігін талдау сияқты молекулалық биология эксперименттерінде де қолдануға болады.
Сақтау шарттары
Өнімді -25℃~-15℃ температурада 2 жыл бойы сақтау керек.
Техникалық сипаттамалар
| Сыртқы түрі | Ұнтақ |
| Саны | 100 мг / 1 г |
| Өнім түрі | RNase A |
Нұсқаулар
Бұл RNase A сақтау ерітіндісін дайындаудың жалпы әдістерінің бірі.Оны дайындауға да боладызертханалық немесе анықтамалық әдебиеттегі дәстүрлі әдістерге сәйкес басқа әдістермен (мысалы10 мМ Tris-HCl, pH 7,5 немесе Tris-NaCl ерітіндісінде тікелей ериді)
1. 10 мг/мл RNase A сақтау ерітіндісін дайындау үшін 10 мМ натрий ацетатын (рН 5,2) пайдаланыңыз.
2. 100 ℃ температурада 15 минут қыздыру.
3. Бөлме температурасына дейін суытып, көлемінің 1/10 бөлігін 1 М Tris-HCl (рН 7,4) қосыңыз, оның рН мәнін 7,4-ке реттеңіз (үшінмысалы, 500 мл 10 мг/мл RNase сақтау ерітіндісінің 1 М Tris-HCl, pH7.4) қосыңыз.
4. 2 жылға дейін тұрақты болуы мүмкін мұздатылған сақтау үшін -20℃ температурада қосалқы қаптамада.
[Ескертпелер]:
RNaseA ерітіндісін бейтарап жағдайда қайнатқанда RNase тұнбасы пайда болады;Оны рН төменірек қайнатыңыз, егер жауын-шашын болса, оны байқауға болады, бұл ақуыз қоспаларының болуынан туындауы мүмкін.Егер қайнағаннан кейін тұнба табылса, қоспаларды жоғары жылдамдықтағы центрифугалау (13000 айн/мин) арқылы алып тастауға болады, содан кейін мұздату үшін қосалқы буып-түйеді.
Ескертпелер
Сіздің денсаулығыңыз бен қауіпсіздігіңізді қамтамасыз ету үшін қажетті ЖҚҚ, зертханалық халат пен қолғапты киіңіз.
