Ультра нуклеаза GMP дәрежесі
Мысықтың №: HC2016A
UltraNuclease GMP дәрежесі гендік инженерия арқылы ішек таяқшасында (E.coli) экспрессияланады және тазартылады және GMP орталарында дайындалады.Ол ғылыми зерттеулерде жасуша супернатанты мен жасуша лизатының тұтқырлығын төмендетеді, ақуызды тазарту тиімділігін арттырады және ақуыздың функционалдық зерттеулерін жақсартады.Өнім сонымен қатар вирустарды тазартуды, вакциналарды өндіруді және ақуыз/полисахаридті фармацевтикалық өндірісті қоса алғанда, биологиялық өнімдердің өнімділігі мен қауіпсіздігін жақсарта отырып, негізгі нуклеин қышқылының қалдықтарын pg дәрежесіне дейін төмендете алады.Сонымен қатар, өнімді жасушалық терапияда және вакцина жасауда адамның шеткергі қанының мононуклеарлы жасушаларының (PBMC) жиналуын болдырмау үшін де қолдануға болады.
Ultranuclease буферде (20мМ Tris-HCL рН 8,0, 2мМ MgCl, 20 мМ NaCl, 50% глицерин) элюцияланған, түссіз, мөлдір сұйықтықтың пайда болуымен стерильденген реагент түрінде беріледі.Бұл өнім GMP процесінің талаптарымен өндірілген және сұйық күйде берілген.
Құрамдас бөліктер
UltraNuclease GMP дәрежесі (250 U/мкл)
Сақтау шарттары
Өнім құрғақ мұзбен жеткізіледі және оны -25℃~-15°C температурада екі жыл сақтауға болады.
Өнім ашылып, 4℃ температурада бір аптадан астам сақталса, сүзгілеуді ұсынамызмикробтық ластануды болдырмау үшін өнім.
Техникалық сипаттамалар
| Expression Host | UltraNuclease генімен рекомбинантты E. coli |
| Молекулалық салмақ | 26,5 кДа |
| электрлік нүкте | 6.85 |
| Тазалық | ≥99% (SDS-PAGE) |
| Сақтау буфері | 20мМ Tris-HCL рН 8,0, 2мМ MgCl, 20 мМ NaCl, 50% глицерин |
|
Бірлік анықтамасы | Бір белсенділік бірлігінің анықтамасы (U) - қолданылатын фермент мөлшері30 минут ішінде ΔA260 сіңіру мәнін 2,625 мл-де 1,0-ге өзгертурН 8,0 37℃ реакция жүйесі (толық қорытылуына баламалы)37 мкг лосось шәуетінің ДНҚ-сы олигонуклеотидтерге). |
Нұсқаулар
1. Үлгі Жинақ
Жабысқақ жасушалар: ортаны алып тастаңыз, жасушаларды PBS-пен жуыңыз және үстіңгі затты алыңыз.
Суспензия жасушалары: жасушаларды центрифугалау арқылы жинаңыз, жасушаларды PBS көмегімен жуыңыз, 6000 центрифугалаңызайн/мин 10 мин, түйіршіктерді жинаңыз.
Escherichia coli: центрифугалау арқылы бактерияларды жинаңыз, PBS көмегімен бір рет жуыңыз, 8000 центрифугалаңызайн/мин 5 мин, және түйіршіктерді жинаңыз.
2. Үлгіні өңдеу
Жиналған жасуша түйіршіктерін массаның (г) көлемге (мл) 1:(10-20) қатынасында лизис буферімен немесе мұзда немесе бөлме температурасында механикалық немесе химиялық әдістермен өңдеңіз (1 г жасуша түйіршіктерінде шамамен
109 ұяшық).
3. Ферментті өңдеу
Реакция жүйесіне 1-5мМ MgCl қосып, рН 8-9-ға дейін реттеңіз.
1 г жасуша түйіршіктерін қорыту үшін 250 бірлік қатынасына сәйкес UltraNuclease қосыңыз, 37℃ температурада 30 минуттан астам инкубациялаңыз.Таңдау үшін «Ұсынылатын реакция уақыты» пішінін қараңыземдеу ұзақтығы.
4. Супернатант Жинақ
30 минут бойы 12000 айн/мин центрифугалаңыз және үстіңгі затты жинаңыз.
Ескертпе: Егер ерітінді қышқыл немесе сілтілі болса немесе жоғары концентрацияда тұз, жуғыш заттар немеседенатуранттар болса, фермент дозасын арттырыңыз немесе сәйкесінше емдеу уақытын ұзартыңыз.
Ұсынылатын реакция шарттарыон
| Параметр | Оңтайлы жағдай | Тиімді кондиционер |
| Mg²+Концентрация | 1-5 мМ | 1-10 мМ |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Температура | 37℃ | 0-42℃ |
| DTT концентрациясы | 0-100 мМ | >0 мм |
| Меркаптоэтанол концентрациясы | 0-100 мМ | >0 мм |
| Бір валентті катион концентрациясы | 0-20 мМ | 0-150 мМ |
| Фосфат лон концентрациясы | 0-10 мМ | 0-100 мМ |
Ұсынылады Реакция Уақыт (37℃, 2 mM Mg²+, pH 8.0)
| Ультрануклеаза мөлшері (соңғы концентрация) | Реакция уақыты |
| 0,25 U/мл | >10 сағ |
| 2,5 U/мл | >4 сағ |
| 25 U/мл | 30 мин |
Ескертулер:
Сіздің денсаулығыңыз бен қауіпсіздігіңізді қамтамасыз ету үшін қажетті ЖҚҚ, зертханалық халат пен қолғап киіңіз!
