Урацил ДНҚ гликозилаза
Урацил-ДНҚ гликозилаза (UNG немесе UDG) – молекулалық салмағы 25 кДа болатын E.coli рекомбинантты клоны.Ол құрамында урацил бар бір жіпті және қос тізбекті ДНҚ-дан бос урацилдің бөлінуін катализдейді және РНҚ-ға қарсы белсенді емес және ПТР күшейту өнімдерінің ластануын болдырмау үшін пайдаланылуы мүмкін.Әсер ету принципі егер ПТР реакциясында dUTP dTTP алмастырылса және dU негіздері бар ПТР күшейту өнімі түзілсе, фермент U негіздерінің гликозидтік байланысын бір жіпті және екі тізбекті түрде таңдай алатындығына негізделген. ДНҚ және ПТР күшейту өнімін бұзады.
Ұсынылатын қолданба
Ластанудың алдын алу күшейту
Сақтау жағдайы
Ұзақ мерзімді сақтау үшін -20°C, қолданар алдында жақсылап араластыру керек, жиі мұздату-ерітуден аулақ болу керек.
Сақтау буфері
20 мМ Tris-HCl (рН 8.0), 150 мМ NaCl, 1 мм EDTA, 1 мм DTT, тұрақтандырғыш, 50% глицерин.
Бірлік анықтамасы
Құрамында dU негіздері бар 1 мкг бір тізбекті ДНҚ-ны 37°C температурада 1 сағатта ыдыратуға қажетті фермент мөлшері 1 бірлік.
Сапа бақылауы
1.SDS-PAGE электрофоретикалық тазалығы 98%-дан жоғары
2.Күшейтудің сезімталдығы, партиядан партияға бақылау, тұрақтылық
3.1U UNG 50 ℃ температурада 2 минут бойы өңделгеннен кейін, 103 данадан төмен U бар үлгі толығымен нашарлауы керек және ешқандай күшейту өнімін шығаруға болмайды.
4.Экзогендік нуклеаза белсенділігі жоқ
Нұсқаулар
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Соңғы концентрация |
| 10 × ПТР буфері (dNTP бос, Mg²+Тегін) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 мкм |
| dUTP (dTTP ауыстыру) | - | 200-600 мкм |
| 25 мМ MgCl2 | 2-8 мкл | 1-4 мМ |
| 5 U/мкл Так | 0,25 | 1,25 U |
| 5 U/мкл UNG | 0,25 (0,1-0,5) | 0,25 U (0,1-0,5) |
| 25 × Праймер қоспасыа | 2 | 1× |
| Үлгі | - | ＜1мкг/реакция |
| ddH₂O | 50-ге дейін | - |
Ескерту: a: qPCR/qRT-PCR үшін пайдаланылса, флуоресцентті зондты реакция жүйесіне қосу керек.Әдетте, 0,2 мкМ түпкілікті праймер концентрациясы жақсы нәтиже бере алады;реакция өнімділігі нашар болғанда, праймер концентрациясын 0,2-1 мкМ диапазонында реттеуге болады.Әдетте, зонд концентрациясы 0,1-0,3 мкм диапазонында оңтайландырылған.Праймер мен зондтың ең жақсы комбинациясын табу үшін концентрация градиенті эксперименттерін жүргізуге болады.
Ескертпелер
1.UNG ферментін ПТР күшейту реакциясына дейін реакция жүйесінен ластанған dUTP күшейту өнімдерін жою үшін, содан кейін өнімнің ластануына байланысты жалған оң нәтижелерді болдырмау үшін пайдалануға болады.
2.Ластануға қарсы ПТР реакциясында қолданылатын UNG ферменті үшін оңтайлы температура әдетте 2 минут ішінде 50℃;инактивация күйі 95℃ 5минут.
3.Жиі мұздату-ерітуден аулақ болыңыз және температураның үлкен ауытқуларына ұшырамаңыз.
4.Күшейтілетін әртүрлі гендердің dUTP пайдалану тиімділігі мен UNG ферментіне сезімталдығы әртүрлі, сондықтан UNG жүйесін пайдалану анықтау сезімталдығының төмендеуіне әкелсе, реакция жүйесін реттеу және оңтайландыру қажет, егер сізге техникалық қолдау қажет болса, хабарласыңыз. біздің компания.
