Вирустық ДНҚ/РНҚ экстракция жинағы
Бұл жинақ мұрын-жұтқыншақ жағындылары, қоршаған орта жағындылары, жасуша культурасының үстіңгі қабаттары және тін гомогенатының үстіңгі қабаттары сияқты үлгілерден жоғары таза вирустық ДНҚ/РНҚ-ны жылдам экстракциялау үшін қолайлы.Жинақ жоғары сапалы вирустық ДНҚ/РНҚ алу үшін фенол/хлороформды органикалық еріткіштерді немесе көп уақытты қажет ететін спиртті тұндыру қажеттілігін болдырмайтын кремнеземдік мембрананы тазарту технологиясына негізделген.Алынған нуклеин қышқылдары қоспалардан таза және кері транскрипция, ПТР, RT-ПТР, нақты уақыттағы ПТР, келесі ұрпақ секвенциясы (NGS) және Northern blot сияқты төменгі ағындық тәжірибелерде пайдалануға дайын.
Сақтау шарттары
15 ~ 25 ℃ температурада сақтаңыз және бөлме температурасында тасымалдаңыз
Құрамдас бөліктер
| Құрамдас бөліктер | 100RXNS |
| Буфер VL | 50 мл |
| RW буфері | 120 мл |
| RNase жоқ ddH2 O | 6 мл |
| FastPure РНҚ бағандары | 100 |
| Коллекция түтіктері (2 мл) | 100 |
| RNase жоқ жинау түтіктері (1,5 мл) | 100 |
Буфер VL:Лизис және байланыстыру үшін ортаны қамтамасыз етіңіз.
RW буфері:Қалдық ақуыздарды және басқа қоспаларды кетіріңіз.
RNase жоқ ddH2O:Спин бағанындағы мембранадан ДНҚ/РНҚ элюта.
FastPure РНҚ бағандары:Атап айтқанда, ДНҚ/РНҚ адсорбцияланады.
Коллекция түтіктері 2 мл:Фильтратты жинаңыз.
RNase жоқ коллекциялық түтіктер 1,5 мл:ДНҚ/РНҚ жинаңыз.
Қолданбалар
Мұрын-жұтқыншақ жағындылары, қоршаған орта жағындылары, жасуша культурасының үстіңгі қабаттары және тіндердің гомогенатының үстіңгі қабаттары.
Өздігінен дайындалған матерials
RNase жоқ тамшуыр ұштары, 1,5 мл RNase жоқ центрифуга түтіктері, центрифуга, құйынды араластырғыш және тамшуырлар.
Эксперимент процесі
Келесі қадамдардың барлығын биоқауіпсіздік шкафында орындаңыз.
1. 200 мкл үлгіні RNase жоқ центрифуга түтігіне қосыңыз (үлгі жеткіліксіз болған жағдайда PBS немесе 0,9% NaCl толтырыңыз), 500 мкл Buffer VL қосыңыз, 15 – 30 сек шайнау арқылы жақсылап араластырыңыз және центрифугалаңыз. қоспаны түтіктің түбіне жинау үшін қысқаша.
2. FastPure РНҚ бағандарын жинау түтіктеріне 2 мл салыңыз.Қоспаны 1-қадамнан FastPure RNA бағандарына тасымалдаңыз, 12000 айн/мин (13400 × г) центрифугалаңыз және фильтратты тастаңыз.
3. FastPure RNA бағандарына 600 мкл Buffer RW қосыңыз, 12 000 айн/мин (13 400 × г) 30 секунд центрифугалаңыз және фильтратты тастаңыз.
4. 3-қадамды қайталаңыз.
5. Бос колонканы 12 000 айн/мин (13 400 × г) 2 мин центрифугалаңыз.
6. FastPure RNA бағандарын жаңа RNase жоқ коллекция түтіктеріне 1,5 мл (жинақта берілген) абайлап тасымалдаңыз және бағанға тигізбестен мембрананың ортасына 30 – 50 мкл RNase жоқ ddH2O қосыңыз.Бөлме температурасында 1 минут тұрып, 12 000 айн/мин (13 400 × г) 1 мин центрифугалаңыз.
7. FastPure РНҚ бағандарын тастаңыз.ДНҚ/РНҚ келесі талдаулар үшін тікелей пайдаланылуы мүмкін немесе қысқа мерзімге -30~ -15°C немесе ұзағырақ кезең үшін -85 ~ -65°C сақталуы мүмкін.
Ескертпелер
Тек зерттеуге арналған.Диагностикалық процедураларда қолдануға болмайды.
1. Үлгілерді алдын ала бөлме температурасына теңестіріңіз.
2. Вирустар өте жұқпалы.Эксперимент алдында барлық қажетті қауіпсіздік шаралары қабылданғанына көз жеткізіңіз.
3. Үлгіні қайталап мұздату мен ерітуден аулақ болыңыз, себебі бұл экстракцияланған вирустық ДНҚ/РНҚ-ның деградациясына немесе шығымының төмендеуіне әкелуі мүмкін.
4. Өздігінен дайындалған жабдыққа RNase жоқ тамшуыр ұштары, 1,5 мл RNase жоқ центрифуга түтіктері, центрифуга, құйынды араластырғыш және тамшуырлар кіреді.
5. Жинақты пайдаланған кезде зертханалық халатты, бір рет қолданылатын латекс қолғаптарын және бір рет қолданылатын масканы киіңіз және RNase ластану қаупін азайту үшін RNase жоқ шығын материалдарын пайдаланыңыз.
6. Басқаша көрсетілмесе, барлық қадамдарды бөлме температурасында орындаңыз.
Механизм және жұмыс процесі
