Robustart Taq ДНҚ полимеразасы
Robustart Taq ДНҚ полимеразасы - бұл ыстық басталатын ДНҚ полимераза.Бұл өнім ПТР жүйесін дайындау және күшейту процесінде праймерлердің спецификалық емес жасытуынан немесе праймерді біріктіруден туындаған спецификалық емес реакцияны жақсырақ тежей алмайды.Сондықтан ол тамаша ерекшелікке ие және төмен концентрация үлгілерін күшейту үшін тиімдірек және мультиплексирленген ПТР күшейту реакциясы үшін қолайлы.Сонымен қатар, бұл өнімнің қолдану мүмкіндігі өте жақсы және ПТР реакцияларының әртүрлі түрлерінде тұрақты күшейту нәтижелерін алуға болады.
Құрамдас бөліктер
1.5 U/мкл Robustart Taq ДНҚ полимеразасы
2.10 × ПТР буфері II (Mg²+ бос) (қосымша)
3.25 мМ MgCl2(міндетті емес)
* 10 × ПТР буфері II (Mg²+ бос) құрамында dNTP және Mg²+ жоқ, dNTP және MgCl қосыңыз.2реакция жүйесін дайындаған кезде.
Ұсынылатын қолданбалар
1.Жылдам күшейту.
2.Бірнеше күшейту.
3.Қанды, жағындыларды және басқа үлгілерді тікелей күшейту.
4.Тыныс алу мүшелерінің ауруларын анықтау.
Сақтау жағдайы
Ұзақ мерзімді сақтау үшін -20°C, қолданар алдында жақсылап араластыру керек, жиі мұздату-ерітуден аулақ болу керек.
*Егер тоңазытқыштан кейін жауын-шашын болса, бұл қалыпты жағдай;араластыру және пайдалану алдында бөлме температурасына теңестіру ұсынылады.
Бірлік анықтамасы
Бір белсенді бірлік (U) шаблон/праймер ретінде белсендірілген лосось шәуетінің ДНҚ-сын пайдаланып, 74°C температурада 30 минут ішінде қышқылда ерімейтін материалға 10 нмоль дезоксирибонуклеотидті қосатын фермент мөлшері ретінде анықталады.
Сапа бақылауы
1.SDS-PAGE электрофоретикалық тазалығы 98%-дан жоғары.
2.Күшейтудің сезімталдығы, партиядан партияға бақылау, тұрақтылық.
3.Экзогендік нуклеаза белсенділігі жоқ, экзогендік эндонуклеаза немесе экзонуклеаза ластануы жоқ
Нұсқаулар
Реакцияны орнату
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Қорытынды концентрация |
| 10 × ПТР буфері II (Mg²+ бос)a | 5 | 1× |
| dNTP (әрбір dNTP 10 мМ) | 1 | 200 мкм |
| 25 мМ MgCl2 | 2-8 | 1-4 мМ |
| Robustart Taq ДНҚ полимераза (5U/мкл) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Праймер қоспасыб | 2 | 1× |
| Үлгі | - | ＜ 1 мкг/реакция |
| ddH2O | 50-ге дейін | - |
Ескертулер:
1) а.Буферде dNTP және Mg²+ жоқ, dNTP және MgCl қосыңыз2реакция жүйесін дайындаған кезде.
2) б.qPCR/qRT-PCR үшін пайдаланылса, реакция жүйесіне флуоресцентті зондтарды қосу керек.Әдетте, 0,2 мкМ түпкілікті праймер концентрациясы жақсы нәтиже береді;реакция өнімділігі нашар болса, праймер концентрациясын 0,2-1 мкМ диапазонында реттеуге болады.Зонд концентрациясы әдетте 0,1-0,3 мкм диапазонында оңтайландырылған.Праймер мен зондтың ең жақсы комбинациясын табу үшін концентрация градиенті эксперименттерін жүргізуге болады.
Термиялық цикл протоколы
| Тұрақты ПТРпроцесс | |||
| Қадам | Температура | Уақыт | Циклдер |
| Алдын ала денатурация | 95℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10-20 сек | 40-50 |
| Күйдіру / ұзарту | 56-64℃ | 20-60 сек | |
| Жылдам ПТРпроцесс | |||
| Қадам | Температура | Уақыт | Циклдер |
| Алдын ала денатурация | 95℃ | 30 сек | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 1-5 сек | 40-45 |
| Күйдіру / ұзарту | 56-64℃ | 5-20 сек | |
Ескертпелер
1.Жылдам ДНҚ полимеразаның күшейту жылдамдығы 1 кб/10 с кем болмауы керек.Әртүрлі ПТР құралдарының температураның көтерілу және төмендеуі, температураны бақылау режимі және жылу өткізгіштік тиімділігі айтарлықтай өзгереді, сондықтан нақты жылдам ПТР құралы үшін оңтайлы реакция жағдайларын оңтайландыру ұсынылады.
2.Жүйе жоғары спецификалық және сезімталдықпен жоғары бейімделгіш.
3.Жоғары сезімталдықты ПТР анықтау реагенттері ретінде пайдалануға жарамды және мультиплексті ПТР күшейту реакцияларында қолдануға болады.
4.5′→3′ полимераза белсенділігі, 5′→3′ экзонуклеаза белсенділігі;3′→5′ экзонуклеаза белсенділігі жоқ;түзету функциясы жоқ.
5.ПТР және RT-ПТР сапалық және сандық тестілеуге жарамды.
6.ПТР өнімінің 3′ соңы A болып табылады, оны тікелей Т векторына клондауға болады.
7.Үш сатылы әдіс жасыту температурасы төмен праймерлер үшін немесе 200 бит-тен ұзын фрагменттерді күшейту үшін ұсынылады.
