UDG/UNG ферменттері
UDG (урацил ДНҚ гликозилаза) ssDNA және dsDNA-дағы урацил негізі мен қант-фосфатты магистраль арасындағы N-гликозидтік байланыстың гидролизін катализдей алады.Ол аэрозольді ластануды оңай басқара алады және ПТР, qPCR, RT-qPCR және LAMP сияқты жалпы молекулалық биология жүйелеріне жарамды.
Техникалық сипаттамалар
| Expression Host | Урацил ДНҚ гликозилаза генімен рекомбинантты E. coli |
| Молекулалық салмақ | 24. 8кДа |
| Тазалық | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Жылу инактивациясы | 95℃, 5~10 мин |
| Бірлік анықтамасы | Бір бірлік (U) 25℃ температурада 30 минут ішінде lμg dU-құрамында dsDNA гидролизін катализдеуге қажетті фермент мөлшері ретінде анықталады. |
Сақтау
Өнімді -25℃~-15°C температурада екі жыл бойы сақтау керек.
Нұсқаулар
1.Келесі жүйе бойынша ПТР реакция қоспасын дайындау
| Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) | Соңғы концентрация |
| 10×ПТР буфері (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 ммоль/LMgCl | 3 | 1,5 ммоль/л |
| dUTP(10 ммоль/л) | 3 | 0,6 ммоль/л |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10ммоль/Сілтіру) | 1 | 0,2 ммоль/сілті |
| Үлгі ДНҚ | X | - |
| Primer1 (10мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| 2-праймер (10мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Taq ДНҚ полимераза (5 U/мкл) | 0. 5 | 0. 05 U/мкл |
| Урацил ДНҚ гликозилаза (UDG/UNG), 1 U/мкл | 1 | 1 U/мкл |
| ddH₂O | 50-ге дейін | - |
Ескерту: Эксперименттік талаптарға сәйкес dUTP соңғы концентрациясын 0,2-0,6 ммоль/л арасында реттеуге болады және 0,2 ммоль/л dTTP таңдаулы түрде қосуға болады.
2.Күшейту процедурасы
| Цикл қадамы | Температура | Уақыт | Циклдер |
| dU-құрамында үлгінің деградациясы | 25℃ | 10мин | 1 |
| УДГ белсендіру, шаблонды бастапқы денатурациялау | 95℃ | 5~10мин | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10 сек |
30-35 |
| Күйдіру | 60℃ | 20 сек | |
| Кеңейтім | 72℃ | 30сек/кб | |
| Соңғы кеңейту | 72℃ | 5 мин | 1 |
Ескерту: 25°C температурадағы реакция уақытын эксперименттік талаптарға сәйкес 5-10 минут ішінде реттеуге болады.
Ескертпелер
1.UDG көптеген ПТР реакция буферінде белсенді.
2.Ферменттерді пайдаланған кезде мұз жәшігінде немесе мұз ваннасында сақтау керек және қолданғаннан кейін бірден -20°C температурада сақтау керек.
3.Сіздің денсаулығыңыз бен қауіпсіздігіңізді қамтамасыз ету үшін қажетті ЖҚҚ, зертханалық халат пен қолғап киіңіз!
