Тінтуірдің генотипін анықтау жинағы

Мысықтың №: HCR2021A

Бұл өнім ДНҚ шикі экстракциясы мен ПТР күшейту жүйесін қоса алғанда, тінтуірдің генотиптерін жылдам анықтауға арналған жинақ болып табылады.Өнімді Lysis Buffer және Proteinase k арқылы қарапайым бөлшектеуден кейін тінтуірдің құйрығынан, құлақтан, саусақтан және басқа тіндерден тікелей ПТР күшейту үшін пайдалануға болады.Түнгі ас қорыту, фенол-хлороформды экстракциялау немесе колонканы тазарту жоқ, бұл қарапайым және эксперименттердің уақытын қысқартады.Өнім 2 кб дейінгі мақсатты фрагменттерді күшейтуге және 3 жұп праймерге дейін мультиплексті ПТР реакцияларына жарамды.2 × Mouse Tissue Direct ПТР Микс құрамында гендік-инженерлік ДНҚ полимераза, Mg бар.²⁺, dNTPs және жоғары күшейту тиімділігін және ингибиторларға төзімділікті қамтамасыз ету үшін оңтайландырылған буферлік жүйе, осылайша ПТР реакциялары үлгі мен праймерлерді қосу және өнімді 1× регидратациялау арқылы жүзеге асырылуы мүмкін.Осы өніммен күшейтілген ПТР өнімінің 3′ ұшында көрнекті «A» негізі бар және оны тазартудан кейін ТА клондау үшін тікелей пайдалануға болады.

Құрамдас бөліктер

Сақтау шарттары

Өнімдерді -25~-15℃ температурада 2 жыл сақтау керек.Ерітуден кейін лизис буферін қысқа мерзімді көп рет пайдалану үшін 2~8℃ температурада сақтауға болады және пайдаланған кезде жақсылап араластырыңыз.

Қолдану

Бұл өнім тінтуірді нокаутқа талдау, трансгенді анықтау, генотиптеу және т.б.

Ерекше өзгешеліктері

1.Қарапайым операция: геномдық ДНҚ алудың қажеті жоқ;

2.Кең қолдану: әртүрлі тінтуір тіндерін тікелей күшейту үшін қолайлы.

Нұсқаулар

1.Геномдық ДНҚ-ның шығарылуы

1) Лизатты дайындау

Тіндердің лизаты лизиске жататын тінтуір үлгілерінің санына сәйкес дайындалады (тін лизаты дозаға сәйкес орнында дайындалуы және пайдалану үшін мұқият араластырылуы керек) және бір үлгіге қажетті реагенттердің үлесі келесідей:

2) Үлгіні дайындау және лизис

Ұсынылатын тіндерді пайдалану

Таза центрифуга түтіктеріне тінтуір тінінің үлгілерінің тиісті мөлшерін алыңыз, әрбір центрифуга түтігіне 200 мкл жаңа тін лизатын қосыңыз, құйыңыз және шайқаңыз, содан кейін 55 ℃ температурада 30 минут инкубациялаңыз, содан кейін 3 минут бойы 98 ℃ температурада қыздырыңыз.

3) Центрифугалау

Лизатты жақсылап шайқаңыз және 5 минут бойы 12000 айн/мин центрифугалаңыз.Супернатантты ПТР күшейту үшін үлгі ретінде пайдалануға болады.Үлгі сақтау үшін қажет болса, үстіңгі затты басқа стерильді центрифуга түтігіне ауыстырыңыз және -20℃ температурада 2 апта бойы сақтаңыз.

2.ПТР күшейту

2× Mouse Tissue Direct ПТР қоспасын -20℃ температурадан алып тастаңыз және мұзда ерітіңіз, төңкеріп араластырыңыз және келесі кестеге сәйкес ПТР реакция жүйесін дайындаңыз (мұзда жұмыс жасаңыз):

Ескерту:

a) Қосылған сома жүйенің 1/10 бөлігінен аспауы керек және тым көп қосылса, ПТР күшейту тежелуі мүмкін.

Ұсынылатын ПТР шарттары

Ескерту:

a) Күтім температурасы: Праймердің Tm мәніне сілтеме жасай отырып, жасыту температурасын праймердің кішірек Tm мәніне +3~5℃ орнату ұсынылады.

Жалпы мәселелер мен шешімдер

1.Мақсатты жолақтар жоқ

1) шамадан тыс лизис өнімі.Үлгінің ең қолайлы көлемін таңдаңыз, әдетте жүйенің 1/10 бөлігінен аспайды;

2) Үлгі өлшемі тым үлкен.Лизатты 10 рет сұйылтыңыз, содан кейін үлгі өлшемін күшейтіңіз немесе азайтыңыз және қайта лизис жасаңыз;

3) Тіндердің үлгілері жаңа емес.Жаңа тіндердің үлгілерін пайдалану ұсынылады;

4) Төмен праймер сапасы.Праймер сапасын тексеру және праймер дизайнын оңтайландыру үшін күшейту үшін геномдық ДНҚ пайдаланыңыз.

2.Арнайы емес күшейту

1) Жасыту температурасы тым төмен және цикл саны тым жоғары.Жасыту температурасын жоғарылатыңыз және циклдар санын азайтыңыз;

2) Үлгі концентрациясы тым жоғары.Үлгінің мөлшерін азайтыңыз немесе шаблонды күшейткеннен кейін 10 рет сұйылтыңыз;

3) Праймердің спецификасы нашар.Праймер дизайнын оңтайландыру.

Ескертпелер

1.Үлгілер арасында айқаспалы ластануды болдырмау үшін бірнеше сынама алу құралдарын дайындау керек, егер қайталап пайдалану қажет болса, әрбір үлгі алудан кейін құралдардың бетін 2% натрий гипохлориті ерітіндісімен немесе нуклеин қышқылын тазартқышпен тазалауға болады.

2.Тінтуірдің жаңа тіндерін пайдалану ұсынылады және күшейту нәтижелеріне әсер етпеу үшін іріктеу көлемі тым үлкен болмауы керек.

3.Лизис буфері жиі мұздату-ерітуден аулақ болуы керек және қысқа мерзімді көп рет пайдалану үшін 2~8℃ температурада сақталуы мүмкін.Төмен температурада сақталса, тұнба пайда болуы мүмкін және оны қолданар алдында толығымен еріту керек.

4.ПТР қоспасы жиі мұздату-ерітуден аулақ болу керек және қысқа мерзімді қайталап пайдалану үшін 4℃ температурада сақтауға болады.

5.Бұл өнім тек ғылыми эксперименттік зерттеулерге арналған және оны клиникалық диагностикада немесе емдеуде қолдануға болмайды.