2×HiF Taq плюс Master Mix
Мысықтың №: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (бояғышпен) – Plus HIF ДНҚ полимеразасы, dNTPs және оңтайландырылған буфері бар пайдалануға дайын 2 × алдын ала араластырылған ерітінді.Полимераза белсенділігін және 3′→5′экзонуклеаза белсенділігін тежейтін бөлме температурасында екі моноклоналды антиденелер оңай және жоғары спецификалық Hot Start ПТР үшін негізгі қоспаға қосылады.Ферментке ұзын фрагментті күшейту қабілетін беру үшін негізгі қоспаға кеңейту факторы қосылады, күшейту ұзындығы 13 кб дейін болуы мүмкін, ферменттің 5′→3′ ДНҚ полимераза белсенділігі және 3′→5′ экзонуклеаза белсенділігі, оның сенімділігі Taq ДНҚ полимеразасынан 83 есе, бұл қарапайым ДНҚ полимеразасынан 9 есе.Ол күрделі шаблондарды күшейту үшін жарамды, күшейту өнімі - доғал ұшы.
2×HIF Taq plus Master Mix (Бояғышпен) жылдам және оңай, жоғары сезімталдық, күшті ерекшелік, жақсы тұрақтылық және т.б. артықшылықтарына ие, реакция жүйесіне тек праймерлер мен шаблондарды қосу қажет және оны екі-үштік арқылы күшейтуге болады. қадамдық хаттама, эксперименттік қадамдарды жеңілдету және уақытты үнемдеу.Бұл өнімде электрофорез индикаторлық бояғыштары бар және ПТР өнімдерін тікелей электрофорез үшін пайдалануға болады.Бұған қоса, өнімде арнайы қорғаныс агенті де бар, осылайша негізгі қоспа қайталап мұздату-ерітуден кейін тұрақты белсенділікті сақтай алады.
Сақтау шарттары
Өнімдерді -25~-15℃ температурада 1 жыл бойы сақтау керек.
Техникалық сипаттамалар
Өнімнің спецификациясы | Мастер-микс |
Шоғырлану | 2× |
Ыстық бастау | Кірістірілген ыстық бастау |
Аспалы | Доғал |
Реакция жылдамдығы | Жылдам |
Өлшем (соңғы өнім) | 13 кб дейін |
Тасымалдау шарттары | Құрғақ мұз |
Өнім түрі | Жоғары дәлдіктегі ПТР премикстері |
Нұсқаулар
1.ПТР реакция жүйесі
Құрамдас бөліктер | Көлемі (мкл) |
ДНҚ үлгісі | Қолайлы |
Алға бағыттаушы (10 мкмоль/л) | 2.5 |
Кері праймер (10 мкмоль/л) | 2.5 |
2×HIF Taq плюс Мастер Микс | 25 |
ddH2O | 50-ге дейін |
2.Әртүрлі үлгілерді пайдалану ұсынылады
Үлгі түрі | Фрагменттерді 1кб-тан 10 кб-қа дейін күшейтіңіз |
Геномдық ДНҚ | 50-200 нг |
Плазмида немесе вирустық ДНҚ | 10пг-20нг |
cDNA | 1-2,5 мкл (соңғы ПТР реакция көлемінің 10%-нан аспаңыз) |
3.Күшейту хаттамасы
1) Екі қадамды хаттама (күрделілік үлгісі)
Цикл қадамы | Темп. | Уақыт | Циклдер |
Бастапқы денатурация | 98℃ | 3 мин | 1 |
Денатурация | 98℃ | 10сек | 30-35 |
Кеңейтім | 68℃ | 30 сек/кб | |
Соңғы кеңейту | 72℃ | 5 мин | 1 |
2) Үш қадамды хаттама (тұрақты хаттама)
Цикл қадамы | Темп. | Уақыт | Циклдер |
Бастапқы денатурация | 98℃ | 3 мин | 1 |
Денатурация | 98℃ | 10сек | 30-35 |
Күйдіру | 60℃ | 20 сек | |
Кеңейтім | 72℃ | 30 сек/кб | |
Соңғы кеңейту | 72℃ | 5 мин | 1 |
3) Күрделі градиент протоколы (күрделілік үлгісі)
Цикл қадамы | Температура | Уақыт | Циклдер |
Бастапқы денатурация | 98℃ | 3 мин | 1 |
Денатурация | 98℃ | 10 сек | 15 (Цикл үшін 1℃ азайту) |
Градиентті күйдіру | 70-55℃ | 20 сек | |
Кеңейтім | 72℃ | 30 сек/кб | |
Денатурация | 98℃ | 10 сек |
20 |
Күйдіру | 55℃ | 20 сек | |
Кеңейтім | 72℃ | 30 сек/кб | |
Соңғы кеңейту | 72℃ | 5 мин | 1 |
Әр түрлі күшейту протоколындағы мүмкіндіктер
Протокоl | Екі қадам | Үш қадам | Градиентті күйдіру |
спец. | жылдам | орташа | баяу |
Ерекшелік | жоғары | орташа | жоғары |
ПТР шығымы | орташа | жоғары | орташа |
Анықтау жылдамдығы | жоғары | орташа | жоғары |
Ескертпелер
Сіздің денсаулығыңыз бен қауіпсіздігіңізді қамтамасыз ету үшін қажетті ЖҚҚ, зертханалық халат пен қолғап киіңіз!