2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Мысықтың №: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ДНҚ экстракциясынсыз немесе үлгіні дайындамай үлгілерден тікелей ПТР орындауға арналған.Бұл реагент ыстық басталатын ДНҚ полимеразасынан, урацил ДНҚ гликозилазасынан (UNG), RNase тежегішінен, MgCl тұрады.2, dNTPs (dTTP орнына dUTP бар) және тұрақтандырғыштар, сандық ПТР (qPCR).Бұл реагент жоғары ингибиторға төзімділікті қалыптастырады және осылайша оны ДНҚ экстракциясынсыз тамақ тампоны, сілекей, антикоагуляцияланған қан, плазма және сарысу сияқты үлгілерді анықтауға тікелей қолдануға болады.Реагент антиингибиторлық ДНҚ-полимераза және UNG ферментінің аралас ферменттері бар qPCR үшін меншікті буферді пайдаланады.Сондықтан ол ингибиторлары бар үлгілерде мақсатты гендердің жақсы күшейтуін ала алады және ПТР қалдығы мен аэрозольді ластанудан туындаған жалған оң күшейтуді тежей алады.Бұл реагент Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche және т.б. сияқты көптеген флуоресцентті сандық ПТР құралдарымен үйлесімді.
Құрамдас бөліктер
1. 50×SensiDirect ферменті/UNG қоспасы
2. 2×SensiDirect Premix буфері (dUTP)
Сақтау шарттары
Барлық компоненттер ұзақ мерзімді сақтау үшін -20 ° C температурада және 3 айға дейін 4 ° C температурада сақталуы керек.Ерігеннен кейін мұқият араластырыңыз және қолданар алдында центрифугалаңыз.Жиі мұздату-ерітуден аулақ болыңыз.
Велосипедпен жүру протоколы
| Қадам | Температура | Уақыт | Цикл |
| Ас қорыту | 50℃ | 2мин | 1 |
| Полимеразды белсендіру | 95℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатура | 95℃ | 10-20 с | 40-50 |
| Күйдіру/кеңейту | 56-64℃ | 20-60 жж |
Тамшуырлау нұсқаулары
| Реагент | Көлемі реакция | Бір реакцияның көлемі | Қорытынды концентрация |
| 2×SensiDirect Premix буфері (dUTP) | 12,5 мкл | 25 мкл | 1× |
| 50×SensiDirect ферменті/UNG қоспасы | 0,5 мкл | 1 мкл | 1× |
| 25×Праймер-зонд қоспасы1, 2 | 1 мкл | 2 мкл | 1× |
| Үлгі3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Жалпы көлемі | 25 мкл | 50 мкл | - |
1. Праймердің соңғы концентрациясы әдетте 0,2 мкм құрайды.Жақсырақ нәтиже алу үшін праймер концентрациясын 0,2-1μM диапазонында оңтайландыруға болады.
2. Жалпы, зонд концентрациясын 0,1-0,3μM диапазонында оңтайландыруға болады.Зондтың оңтайлы концентрациясы нақты уақыттағы ПТР күшейту құралына, зонд түріне және флуоресцентті таңбалау затының түріне байланысты.Құрал нұсқаулығын немесе әрбір флуоресцентті зондтың арнайы талаптарын қараңыз.
3. Сынамалардың әртүрлі түрлері ингибитордың әртүрлі түрлері мен мазмұнын және мақсатты геннің көшірме санын қамтиды.Үлгі көлемін нақты жағдай бойынша қарастыру керек.Қажет болса, нуклеазасыз суды немесе TE буферін қосу арқылы үлгіні сұйылтыңыз.
4. Әртүрлі үлгілердің ұсынылатын көлемі:
| Үлгі | Бірге арналған көлемі 50 мкл реакция | Максималды арақатынас |
| Антикоагуляцияланған жалпы қан | 2,5 мкл | 5% |
| Плазма | 15 мкл | 30% |
| Сарысу | 10 мкл | 20% |
| Тамақтың тампоны | 10 мкл | 20% |
| Сілекей | 10 мкл | 20% |
Сапа бақылауы
1. Функцияны анықтау: qPCR сезімталдығы, ерекшелігі және қайталануы.
2. Экзогендік нуклеаза белсенділігі жоқ: экзогендік эндонуклеаза және экзонуклеаза ластануы жоқ.
Өнім туралы ескертулер
1. Бұл өнім 1-5 минут ішінде белсендірілетін ДНҚ полимеразасының жаңа түрін пайдаланады. Оның реакция буфері оңтайландырылғандықтан, ол зонд әдісін қолданатын қос немесе бірнеше флуоресцентті сандық ПТР үшін қолайлырақ.
2. ПТР күшейтуінің Rn мәні тым төмен болса немесе күшейту анық тежелсе, үлгі мөлшерін азайту, реакция көлемін арттыру немесе үлгіні алдыңғы сұйылту нәтижелерді жақсартуы мүмкін.
3. Қан, сілекей, зәр, жұлдыру жағындысы және т.б. жинау клиникалық критерийлерге сәйкес болуы керек және нуклеин қышқылының ыдырауын болдырмау үшін жаңа үлгіні пайдалануға болады.
4. Әр түрлі ампликондардың dUTP-ке пайдалану тиімділігі мен UNG-ге сезімталдығы әртүрлі болғандықтан, UNG жүйесін пайдалану кезінде анықтау сезімталдығы төмендесе, реагенттерді оңтайландыру керек.Қажет болса, техникалық қолдау алу үшін бізге хабарласыңыз.
5. Бір сатылы реакциялар арасында тасымалданатын ПТР өнімдерінің күшейтілуін болдырмау үшін күшейту үшін арнайы тәжірибе алаңы мен тамшуыр қажет.Қолғаппен операция жасаңыз және жиі ауыстырыңыз және ПТР күшейтілгеннен кейін реакция түтігін ашпаңыз.
