Жабайы Так ДНҚ полимеразасы
Taq ДНҚ Полимераза - 5′→3′ полимераза белсенділігі мен 5′ флап эндонуклеаза белсенділігі бар Thermus aquaticus YT-1 термостабельді ДНҚ полимеразасы.
Құрамдас бөліктер
| Құрамдас | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq буфері | 2×1 мл | 2×10 мл | 2×50 мл | 5×200 мл |
| Taq ДНҚ полимераза (5 U/мкл) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 5×10 мл |
Сақтау жағдайы
0°C төмен температурада тасымалдау және -25°C~-15°C температурада сақтау керек.
Бірлік анықтамасы
Бір бірлік 75°C температурада 30 минут ішінде қышқылда ерімейтін материалға 15 нмоль dNTP қосатын ферменттің мөлшері ретінде анықталады.
Сапа бақылауы
1.Протеин тазалығын талдау (SDS-PAGE):Taq ДНҚ полимеразасының тазалығы SDS-PAGE талдауы арқылы ≥95% анықталды.
2.Endонуклеаза белсенділігі:37 ℃ температурада 16 сағат бойы 1 мкг λДНҚ бар кем дегенде 5 U Taq ДНҚ полимеразасы анықталғандай анықталатын деградацияға әкелмейді.
3.Экзонуклеаза белсенділігі:37 ℃ температурада 16 сағат бойы 1 мкг λ -Hind Ⅲ дайджест ДНҚ бар кем дегенде 5 U Taq ДНҚ полимеразасы анықталғандай анықталатын деградацияға әкелмейді.
4.Никаза белсенділігі:37°C температурада 16 сағат бойы 1 мкг pBR322 ДНҚ бар кем дегенде 5 U Taq ДНҚ полимеразасы анықталғандай анықталатын деградацияға әкелмейді.
5.RNase белсенділігі:37°C температурада 16 сағат бойы 1,6 мкг MS2 РНҚ бар кем дегенде 5 U Taq ДНҚ полимеразасы анықталғандай анықталатын деградацияға әкелмейді.
6.E. coliДНҚ:5 U Taq ДНҚ полимеразасы E. coli 16S rRNA локусына тән праймерлері бар TaqMan qPCR көмегімен E. coli геномдық ДНҚ бар-жоғына тексеріледі.E. coli геномдық ДНҚ ластануы ≤1 көшірме.
7.ПТР күшейту (5,0 кб Ламбда ДНҚ)- ПТР күшейтудің 25 циклі үшін 5 бірлік Taq DNA полимеразасы бар 5 нг Ламбда ДНҚ бар 50 мкл реакция күтілетін 5,0 кб өнімге әкеледі.
Реакцияны орнату
| Құрамдас бөліктер | Көлемі |
| Үлгі ДНҚa | міндетті емес |
| 10 мкм Алға праймер | 1 мкл |
| 10 мкм кері праймер | 1 мкл |
| dNTP қоспасы (әрқайсысы 10 мМ) | 1 мкл |
| 10×Taq буфері | 5 мкл |
| Так ДНҚ полимеразаб | 0,25 мкл |
| Нуклеазсыз су | 50 мкл дейін |
Ескертулер:
1) Әртүрлі шаблондардың оңтайлы реакция концентрациясы әртүрлі.Келесі кестеде 50 мкл реакция жүйесінің ұсынылатын үлгіні пайдалануы көрсетілген.
| ДНҚ | Сома |
| Геномдық | 1 нг-1 мкг |
| Плазмидті немесе вирустық | 1 пг-1 нг |
2) Taq DNA Polymerase оңтайлы концентрациясы арнайы қолданбаларда 0,25 мкл~1 мкл аралығында болуы мүмкін.
РеакцияБағдарлама
| Қадам | Температура(°C) | Уақыт | Циклдер |
| Бастапқы денатурацияa | 95 ℃ | 5мин | - |
| Денатурация | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 Цикл |
| Күйдіруб | 60 ℃ | 15 с | |
| Кеңейтім | 72 ℃ | 1кб/мин | |
| Соңғы кеңейтім | 72 ℃ | 5мин | - |
Ескертулер:
1) Бастапқы денатурация жағдайы күшейту реакцияларының көпшілігі үшін қолайлы және шаблон құрылымының күрделілігіне сәйкес өзгертілуі мүмкін.Үлгі құрылымы күрделі болса, бастапқы денатурация әсерін жақсарту үшін алдын ала денатурация уақытын 5 – 10 минутқа дейін ұзартуға болады.
2) Жасыту температурасын праймердің Tm мәніне сәйкес реттеу қажет, ол әдетте праймердің Tm мәнінен 3~5 ℃ төмен орнатылады;Күрделі үлгілер үшін тиімді күшейтуге қол жеткізу үшін күйдіру температурасын реттеу және ұзарту уақытын ұзарту қажет.
